ICS 11.220 CCS B 41 DB 51 四川省 地方标准 DB51/T 3014—2023 家畜螨病诊断与防控技术规范 Standard of d ignositic and c ontrol t echniques of livestock a cariasis 2023 - 02 - 07发布 2023 - 04 - 08实施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 3014 —2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 3 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 3 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 3 4 诊断 ................................ ................................ ............... 3 5 防治 ................................ ................................ ............... 7 附录 A（资料性） 疥螨病临床症状 ................................ ...................... 8 附录 B（资料性） 痒螨病临床症状 ................................ ...................... 9 附录 C（资料性） 足螨病临床症状 ................................ ..................... 10 附录 D（资料性） 虫体形态学 ................................ ......................... 11 附录 E（规范性） ELISA检测试剂配制和重组抗原制备 ................................ ... 13 附录 F（规范性） PCR检测试剂配制与 PCR扩增结果参考 ................................ . 14 参考文献 ................................ ................................ ............. 15 DB51/T 3014 —2023 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由四川省农业农村厅提出、归口 并解释。 本文件起草单位：四川农业大学。 本文件主要起草人：杨光友、古小彬、何冉、徐璟、谢跃。 本次为首次发布。 DB51/T 3014 —2023 3 家畜螨病诊断与防控技术规范 1 范围 本文件规定了家畜螨病诊断与防控技术规范。 本文件适用于家畜螨病 的诊断、检疫与防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 36195 -2018 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY/T5030 -2016 无公害农产品 兽药使用准则 中华人民共和国兽药典 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 家畜螨病 livestock acariasis 由疥螨科 （ Sarcoptidae ） 的疥螨 （ Sarcoptes scabiei） 和痒螨科 （ Psoroptidae ） 的痒螨 （ Psoroptes ovis）、足螨（ Chorioptes ）寄生于家畜 （牛、羊、猪、兔和马 ）皮肤所引起的外寄生虫病 的统称。 3.2 疥螨病 sarcoptic mange 由疥螨（ Sarcoptes scabiei ）寄生于家畜皮肤表皮内引起相应的临床症状的外寄生虫病。 3.3 痒螨病 psoroptic mange 由绵羊痒螨（ Psoroptes ovis ）寄生于家畜皮肤表面引起相应的临床症状的外寄生虫病。 3.4 足螨病 choroptic mange 由牛足螨（Chorioptes bovis ）和德州足螨（ Chorioptes texanus ）寄生于家畜皮肤表面引起相应 的临床症状的外寄生虫病。 4 诊断 疥螨病、痒螨病和足螨病的 临床症状 4.1 4.1.1 疥螨病 家畜疥螨病多始发于宿主皮肤柔软、被毛短而少的部位，主要以剧痒， 结痂，皮肤增厚和畜体消瘦 为主要临床特征，不同动物的发病部位存在差异（见附录 A）。 DB51/T 3014 —2023 4 4.1.2 痒螨病 家畜痒螨病多始发生于毛浓密的部位，主要以瘙痒 ，结痂，脱毛和畜体消瘦为主要临床特征，不同 动物的发病部位存在差异（见附录 B）。 4.1.3 足螨病 家畜足螨病多始发生 于皮肤细嫩的部位，主要以 瘙痒，结痂和 患处脱毛 为主要临床特征， 不同动物 的发病部位存在差异（见附录 C）。 疥螨病、痒螨病和足螨病的显微镜镜检 4.2 4.2.1 病料的采集 4.2.1.1 疥螨病病料的采集 剪去患病部和健康部皮肤交界处的毛后， 采用经火焰消毒后的小刀垂直于皮肤面用力刮取交界处痂 皮，直至刮处皮肤微有出血痕迹，将刮取物收集到容器内，待检。刮破处 皮肤用碘伏等消毒剂进行消毒 处理。 4.2.1.2 痒螨病病料的采集 用消毒小刀 刮取患病部皮肤表面的痂皮，将痂皮收集到容器内，待检。取痂皮 处皮肤用 碘伏等消毒 剂进行消毒处理。 4.2.1.3 足螨病病料的采集 用消毒小刀用力刮取 患病部皮肤表面的痂皮 ，将痂皮收集到容器内，待检。取痂皮 处皮肤用 碘伏等 消毒剂进行消毒处理。 4.2.2 显微镜镜检 4.2.2.1 热源法 将4.2.1采集的病料放入平皿内，将平皿放入 25℃～37℃的恒温箱中 0.5h～1h后，将平皿置于显 微镜下检查。 4.2.2.2 直接涂片法 将4.2.1采集的病料放置于载玻片上，滴加 1滴5%甘油（丙三醇）水溶液，加 盖另一新的 载玻片，搓 压载玻片至病料散开， 移去病料上方的载 载片，加盖 玻片后，置显微镜下检查。 4.2.2.3 浓集法 当螨虫数量较少 或病料采自死亡家畜 时，可采用浓集法收集螨虫镜检。将 4.2.1刮取的较多 病料放 入10%氢氧化钠溶液并浸泡过夜或加热煮 5min左右，待其溶液自然沉淀 15min，取沉淀物镜检。或将上述 沉淀物转入试管中， 再加入 60%硫代硫酸钠溶液， 试管口加盖玻片， 静置 5min～10min后， 取盖玻片 镜检。 4.2.3 镜检结果判定 4.2.3.1 病料中镜检到疥螨虫体 或虫卵（见附录D.1），判定为显微镜镜检 阳性。 4.2.3.2 病料中镜检到绵羊痒螨虫体 或虫卵（见附录D.2），判定为显微镜镜检 阳性。 4.2.3.3 病料中镜检到足螨虫体 或虫卵（见附录 D.3），判定为显微镜镜检 阳性。 DB51/T 3014 —2023 5 疥螨病和痒螨病的间接 ELISA抗体检测 4.3 4.3.1 材料准备 4.3.1.1 试剂 碳酸盐缓冲液（ 0.05M, pH 9.6 ）、PBS缓冲液（ 0.01M, pH 7.4 ）、PBST缓冲液（ 0.01M, pH 7.4 ）、 2M硫酸（2M H 2SO4）、LB液体培养基的配制见附录 E.1。 辣根过氧化物酶（ HRP）标记的 二抗：HRP-羊抗牛IgG，用于检测牛血清； HRP-兔抗羊IgG，用于检 测羊血清； HRP-羊抗猪IgG，用于检测猪血清； HRP-羊抗兔IgG，用于检测兔血清； HRP-兔抗马IgG，用 于检测马血清 。 4.3.1.2 阳性血清和阴性血清对照样品 疥螨阳性血清采自经显微镜镜检到疥螨虫体或虫卵的动物血清 ；疥螨阴性血清采自无疥螨流行史且 经显微镜镜检呈阴性的动物血清 。 痒螨阳性血清采自经显微镜镜检到痒螨虫体或虫卵的动物血清 ；痒螨阴性血清采自无痒螨流行史且 经显微镜镜检呈阴性的动物血清。 4.3.1.3 重组抗原制备 疥螨烯醇化酶重组抗原（ rSar-Eno）和痒螨 丝氨酸蛋白酶 抑制剂重组抗原（ rPsoc 27）按照