ICS 65.100 B 17 中华人民共和国国家标准 GB/T 15670.19—2017 农药登记毒理学试验方法 第19部分：体外哺乳动物细胞染色体 畸变试验 Toxicological test methods for pesticides registration- Part 19:In vitro mammalian cells chromosome aberration test 2018-02-01实施 2017-07-12 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 15670.19—2017 前言 GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分： 第1部分：总则； 第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法； 第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验 概率单位法； 第5部分：急性经皮毒性试验； 一第6部分：急性吸入毒性试验； 第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验； 第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验； 第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验； 第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验； 第12部分：短期重复吸入染毒（28天）毒性试验； 第13部分：亚慢性毒性试验； 第14部分：细菌回复突变试验； 第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验； 第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验； 第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验； 第18部分：啮齿类动物显性致死试验； 第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验； 第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验； 第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验； 第23部分：致畸试验； 第24部分：两代繁殖毒性试验； 一第25部分：急性迟发性神经毒性试验； 第26部分：慢性毒性试验； 一第27部分：致癌试验； 第28部分：慢性毒性与致癌合并试验； 第29部分：代谢和毒物动力学试验。 本部分为GB/T15670的第19部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分起草单位：农业部农药检定所。 本部分主要起草人：张宏伟、张丽英、陶传江。 1 GB/T 15670.19—2017 农药登记毒理学试验方法 第19部分：体外哺乳动物细胞染色体 畸变试验 1范围 GB/T15670的本部分规定了体外哺乳动物细胞染色体畸变试验的基本原则、方法和要求。 本部分适用于为农药登记而进行的体外哺乳动物细胞染色体畸变试验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件。 GB/T15670.14一2017农药登记毒理学试验方法第14部分：细菌回复突变试验 3nc术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 结构畸变structuralaberration 在细胞分裂的中期相阶段，用显微镜检出的染色体结构改变，表现为缺失、断片、互换等。结构畸变 可分为染色体型畸变（chromosome-typeaberration）和染色单体型畸变（chromatid-typeaberration） 两类。 3.2 染色单体型畸变chromatid-typeaberration 染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤 3.3 染色体型畸变 chromosome-typeaberration 3.4 有丝分裂指数 mitoticeindex 中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值，是一项反映细胞增殖程度的指标。 3.5 多倍体polyploidy 哺乳动物细胞染色体数目正常为二倍体，在化学诱变剂的作用下染色体数目成倍地增加，如三倍 体、四倍体等。 4试验目的 本试验检测受试物是否引起培养的哺乳动物细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。 1 GB/T15670.19—2017 5试验概述 阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停正在中期分裂相，随后收获细胞，制片，染色，分析染色 体畸变。 大部分的致突变剂导致染色单体型畸变，偶有染色体型畸变发生。虽然多倍体的增加可能预示着 有染色体数目畸变的可能，但本方法并不适合用于测定染色体的数目畸变。 6试验方法 6.1 受试物和试剂 6.1.1受试物的配制 固体受试物需溶解或悬浮于溶剂中，用前稀释至适合浓度；液体受试物可以直接加人试验系统和/ 或用前稀释至适合浓度。受试物应在使用前新鲜配制，否则就必须证实贮存不影响其稳定性。溶剂必 须是非致突变物，不与受试物发生化学反应，不影响细胞存活和S9活性。首选溶剂是培养液（不含血 清或水，二甲基亚砜（DMSO)也是常用溶剂，使用时浓度不应大于0.5%。 6.1.2剂量设计 6.1.2.1最高浓度的选择 决定最高浓度的因素是细胞毒性、受试物在试验系统中的溶解度以及pH或渗透压（osmolality）的 改变。 细胞毒性的确定应使用指示细胞完整性和生长情况的指标，在活化系统存在或不存在的两种条件 下确定细胞毒性，例如细胞覆盖程度（degreeofconfluency）、活细胞数（viablecellcounts）或有丝分裂 指数（mitoticindex）。应在预试验中确定细胞毒性和溶解度。 6.1.2.2试验剂量 至少应设置3个可供分析的浓度。当有细胞毒性时，其浓度范围应包括从最大毒性至儿乎无毒性； 浓度间隔系数通常介于2~/10之间。 在收获细胞时，最高浓度应能明显降低细胞覆盖程度、细胞计数或有丝分裂指数（均应大于50%）。 对于相对无细胞毒性的化合物，最高浓度应是5uL/mL，5mg/mL或0.0lmol/L。 对于相对不溶的受试物，在接近不溶解浓度时仍无细胞毒性，则最高剂量应采用染毒结束时的最终 应设一个以上可见沉淀的浓度。 6.1.3对照物 6.1.3.1阳性对照物 可根据受试物的性质和结构选择适宜的阳性对照物，阳性对照物应是已知的断裂剂，能引起可检出 的并可重复的阳性结果。不需要外源性代谢活化系统的阳性物有甲磺酸甲酯（methylmethanesulfon- ate，MMS）、甲磺酸乙酯（ethylmethanesulfonate，EMS）、乙基亚硝基脲（ethylnitrosourea）、丝裂霉素C （mitomycinC），4-硝基喹琳-N-氧化物（4-nitroquinoline-N-oxide）。需要外源性代谢活化系统的阳性 2