ICS 65.020.30 CCS NAASS B40/49 宁 夏 回 族 自 治 区 农 学 会 团体标准 T/NAASS 015—2022 宁夏高产奶牛胚胎移植技术规程 Regulations for embryo transplantation of high-yield dairy cows in Ningxia （报批稿） 在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。 2022 - 11 - 11发布 2022 - 12 - 15实施 宁夏回族自治区农学会 发布 全国团体标准信息平台 T/NAASS 015 —2022 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文 件的结构和起草规则》的规定 起草。 专利免责声明：本文件的 某些内容可能涉及专利 ，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏回族自治区科技厅提出。 本文件由宁夏回族自治区农学会归口。 本文件起草单位：宁夏回族自治区畜牧工作站、宁夏职业技术学院、宁夏大学。 本文件主要起草人：脱征军、张秀陶、陶金忠、虎雪姣、李委奇、肖爱萍、张建勇、晁雅琳、李毓 华、杨文琳、 邵怀峰、 周佳敏、张宇、 赵洁、朱继红、 张令凯、施安、杨卓、王瑜、田博文、温万、 田 佳、厉龙、王玲、许立华。 全国团体标准信息平台 T/NAASS 015 —2022 1 宁夏高产奶牛胚胎移植技术规程 1 范围 本文件规定了宁夏高产奶牛胚胎移植供体牛的选择与饲养管理、冷冻精液选择、供体牛超数排卵、 供体牛人工授精、胚胎采集与回收、胚胎移植技术操作要求。 本文件适用于宁夏高产奶牛胚胎生产、移植技术推广应用的规范化操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4143 牛冷冻精液 GB/T 3157 中国荷斯坦牛 GB/T 31582 牛性控冷 冻精液 NY/T 34 奶牛饲养标准 NY/T 815 肉牛饲养标准 NY/T 1335 牛人工授精技术规程 NY/T 1445 奶牛胚胎移植技术规程 NY/T 3646 奶牛性控 冻精人工授精技术规程 DB64/T 1787 奶牛选种选配技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 胚胎移植 Embryo Transplantation 选择与供体牛生理状况相近的受体牛，用非手术方法将胚胎移植到受体牛子宫角内，以便胚胎继续 发育。 4 供体牛的选择与饲养管理 4.1 供体牛的选择 4.1.1 供体牛应符合 GB/T 3157中荷斯坦母牛标准，系谱档案完整，体型线性评分在良好以上，体格 健壮，无遗传缺陷。 4.1.2 成年母牛做供体牛时，应选择参加奶牛生产性能测定（ DHI)，生产性能优良的牛，或经遗传评 估（EBV) 有育种价值的牛。 4.1.3 青年母牛做供体牛时，应选择全基因组检测（ GEBV)有育种价值、或其父母生产性能优良的牛。 4.2 供体牛的饲养管理 4.2.1 供体牛饲养环境应保持舒适、稳定，避免出现各种环境、免疫接种等应激反应。 4.2.2 保证科学、合理、平衡的日粮营养。饲养标准按照 NY/T 34执行，管理要求按照 NY/T 1445 规 定执行。 4.2.3 超数排卵前 1个月，根据供体牛体况，适量增加精料，适量补充复合维生素、微量元素，超数 全国团体标准信息平台 T/NAASS 015 —2022 2 排卵期间体重应处于增重状态。 5 冷冻精液选择 5.1 选择谱系清楚，遗传性状稳定，生产性能优良的验证种公牛冷冻精液与供体牛进行选配。选种选 配的要求按照 DB64/T 1787 规定执行。 5.2 常规冷冻精液质量符合 GB 4143的规定，性控冷冻精液质量符合 GB/T 31582 的规定。 6 供体牛超数排卵 6.1 季节选择 以春秋季节为宜，应尽量避开酷暑和严寒时节。 6.2 激素选择 超数排卵选用的生殖激素名称、类型、注射剂量及功能见附录 A。 6.3 超数排卵方案 6.3.1 不考虑供体牛的发情时间，避开发情期。应用 CIDR+FSH+PGF2 α法，进行超数排卵处理。使用 专用CIDR枪将CIDR送至供体牛子宫颈口处。 6.3.2 放置CIDR之日计为 0 d，在7 d～9 d开始，采用连续递减注射法肌肉注射 FSH，每天早、晚间 隔12 h各注射FSH 1次，连续注射 4 d。 6.3.3 在第5次和第6次注射FSH时，同时注射 PGF2α。 6.3.4 在第6次注射FSH后，取出 CIDR，用生理盐水分别溶解 320万IU青霉素和 100万IU链霉素， 并与50 ml生理盐水混合后，冲洗供体牛阴道。具体操作方法见附录 B.1。 7 供体牛人工授精 7.1 供体牛发情鉴定 在第8次注射FSH后，每隔 4 h观察一次发情，每次 0.5 h以上。以供体牛站定接受其它牛爬跨做为发 情的标准，并做好发情记录。 7.2 供体牛常规冷冻精液人工授精 7.2.1 供体牛站立发情后 12 h进行第1次人工授精，同时肌肉注射 0.05 mg LHRH-A3；间隔12 h进行 第2次人工授精。 7.2.2 第2次人工授精后，通过直肠检查供体牛卵巢，如果还有大量卵泡没有排放，肌肉注射 0.05 mg LHRH-A3, 间隔12 h第3次人工授精。 7.2.3 前两次人工授精时，每次使用 2支冷冻精液，第 3次人工授精使用 1支冷冻精液。 7.2.4 人工授精应输配至供体母牛子宫体。具体操作方法按照 NY/T 1335中的规定执行。 7.3 供体牛性控冷冻精液人工授精 7.3.1 配种间隔时间 8 h～10 h，人工授精每次使用 2支性控冷冻精液。其他操作程序与常规冷冻精液 人工授精相同。 7.3.2 人工授精应输配至左右两侧子宫角大弯处。具体操作方法按照 NY/T 3646中的规定执行。 8 胚胎采集与回收 全国团体标准信息平台 T/NAASS 015 —2022 3 8.1 准备工作 8.1.1 在供体牛发情后的第 6 d，检胚实验室应提前做好清洁和消毒，室温宜在 20 ℃～25 ℃，避免阳 光直射。 8.1.2 提前准备好胚胎采集回收所用的器械设备及试剂耗材，并做好清洗、消毒灭菌等。要求见附录 C、附录D。具体操作方法按照 NY/T 1445 中规定执行。 8.2 胚胎采集 在供体牛发情后的第 6 d～7 d, 用非手术方法进行回收。具体操作方法按照 NY/T 1445 规定执行。 8.3 检胚 将回收的冲卵液迅速送到检胚室，通过体视显微镜进行检胚处理。具体操作方法按照 NY/T 1445 规 定执行。 8.4 胚胎鉴定 对检出的胚胎进行鉴定、分级和洗涤。具体操作方法按照 NY/T 1445 规定执行。 8.5 胚胎的保存 经过鉴定后的可用胚胎，应尽快进行移植或冷冻保存。具 体操作方法按照 NY/T 1445规定执行。 8.6 记录 做好每一批次每头供体牛的超数排卵、 人工授精、 胚胎回收及处理和胚胎生产统计记录， 见附录 E、 附录F。 9 胚胎移植 9.1 受体牛的选择与饲养管理 9.1.1 受体牛的选择 受体牛应选择体格较大、健康、繁殖机能正常的荷斯坦青年牛或杂交改良肉用母牛做受体，人工授 精两次不孕的不得作为受体。 9.1.2 受体牛的饲养管理 9.1.2.1 受体牛饲养环境按照 4.2.1执行。 9.1.2.2 应保证受体牛科学、平衡的日粮营养，饲养标准按照 NY/T 34和NY/T 815 执行。 9.1.2.3 受体移植前 1个月开始补饲，适量补充微量元素和复合维生素，移植期间体重应处于增重状 态。饲养标准按照 NY/T 34和NY/T 815 执行。 9.2 受体牛的发情处理 9.2.1 自然发情 黄体良好且与供体牛发情前后相差不超过± 24 h的自然发情受体牛，宜作为合格受体进行胚胎移植。 9.2.2 同期发情 9.2.2.1 处于发情周期 7 d～15 d且直肠检查黄体良好的受体，采用 1次注射PGF2α法进行同期发情 处理。处理时间与供体牛相吻合。 9.2.2.2 在不考虑发情周期的情况下，宜采用 2次注射PGF2α或CIDR+PGF2 α法对受体进行同期发情 处理。处理时间与供体牛相吻合。 9.2.3 发情观察 全国团体标准信息平台 T/NAASS 015 —2022 4 同期发情处理的受体牛，在注射 PGF2α 24 h后开始跟群观察发情，以稳定站立接受其它牛爬跨为 准确发情标准，观察发情时间持续至撤栓后 96 h，做好发情观察记录。 9.3 黄体检查 9.3.1 受体牛发情第 6 d，通过直肠触摸子宫、卵巢，检查卵巢上黄体发育情况，确定排卵侧是否有功 能性黄体。 9.3.2 可移植的受体牛应具有以下特征：子宫发育良好，形态质地正常；黄体直径 l cm以上且突起明 显，质地稍硬弹