书 书 书犐犆犛 ７１ ． ０４０ ． １０ 犖 ５３ 团 　　　 体 　　　 标 　　　 准 犜 ／ 犆犐犕犃 ００１２ — ２０１９ 火锅底料中吗啡 、 可待因胶体金免疫层析检测卡 犆狅犾犾狅犻犱犪犾犵狅犾犱犻犿犿狌狀狅犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔狋犲狊狋犮犪狊狊犲狋狋犲犳狅狉犿狅狉狆犺犻狀犲犪狀犱犮狅犱犲犻狀犲犻狀狋犺犲犺狅狋狆狅狋 ２０１９  ０７  １８ 发布 ２０１９  １０  ０１ 实施 中国仪器仪表行业协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 本标准由中国仪器仪表行业协会食品快检专业委员会提出 。 本标准由中国仪器仪表行业协会归口 。 本标准起草单位 ： 北京智云达科技股份有限公司 、 北京勤邦生物技术有限公司 、 北京普赞生物技术有限公司 、 北京众检四方检验检测技术有限公司 、 北京市理化分析测试中心 、 中粮营养健康研究院 、 中国科学院过程工程研究所 。 本标准主要起草人 ： 钱瑞 、 张敬晗 、 桑华春 、 王覃 、 曹擎 、 谢艳红 、 王文 臖 、 王新华 、 曹东山 、 邓乾民 、 孙清 、 张晓梅 、 贾丽 、 钱承敬 、 张贵峰 、 马立利 。 Ⅰ 犜 ／ 犆犐犕犃 ００１２ — ２０１９ 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 火锅底料中吗啡 、 可待因胶体金免疫层析检测卡 １ 　 范围 本标准规定了火锅底料中吗啡 、 可待因胶体金免疫层析检测卡术语和定义 、 要求 、 试验方法 、 检验规则 、 标志 、 使用说明书 、 包装 、 运输和贮存 。 本标准适用于采用竞争性抑制免疫层析原理定性分析的火锅底料中吗啡 、 可待因胶体金免疫层析检测卡 （ 以下简称 “ 检测卡 ”）。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ１９１ 　 包装储运图示标志 ＧＢ ／ Ｔ２８２８．１ — ２０１２ 　 计数抽样检验程序 　 第 １ 部分 ： 按接收质量限 （ ＡＱＬ ） 检索的逐批检验抽样计划 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＤＢ３１ ／ ２０１０ — ２０１２ 　 食品安全地方标准 　 火锅食品中罂粟碱 、 吗啡 、 那可丁 、 可待因和蒂巴因的测定 　 液相色谱  串联质谱法 ＫＪ２０１７０７ 　 食品中吗啡 、 可待因的快速检测 　 胶体金免疫层析法 ： 总局关于发布 《 食品中吗啡 、 可待因成分的快速检测 　 胶体金免疫层析法 》 等 ３ 项食品快速检测方法的公告 （ ２０１７ 年第 ９２ 号 ）［ ＥＢ ／ ＯＬ ］ ． （ ２０１７８４ ）［ ２０１７１２１ ］ ．ｈｔｔｐ ：／／ ｓａｍｒ．ｃｆｄａ．ｇｏｖ．ｃｎ ／ ＷＳ０１ ／ ＣＬ００８７ ／ １７６０２０．ｈｔｍｌ ３ 　 术语和定义 ＫＪ２０１７０７ 界定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 ３ ． １ 胶体金免疫层析法 　 犮狅犾犾狅犻犱犪犾犵狅犾犱犻犿犿狌狀狅犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犪狊狊犪狔 利用竞争抑制免疫层析的原理 ， 样本中的吗啡 、 可待因在层析的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合 ， 抑制了抗体和 ＮＣ 膜检测线 （ Ｔ 线 ） 上吗啡 、 可待因  蛋白偶联物的结合 ， 从而导致检测线颜色深浅的变化 。 通过检测线的颜色深浅变化或与控制线 （ Ｃ 线 ） 颜色深浅比较 ， 对样品中吗啡 、 可待因进行定性判定 。 ３ ． ２ 检测卡 　 狋犲狊狋犮犪狊狊犲狋狋犲 由试纸条及配套卡壳组装而成 （ 见图 １ ）。 其中 ， 试纸条由样品垫 、 金标垫 、 硝酸纤维素膜 （ ＮＣ 膜 ） 和吸水纸构成 。 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维素膜 （ ＮＣ 膜 ） 上 ， 胶体金标记试剂 （ 多克隆抗体或单克隆抗体 ） 吸附在金标垫或金标微孔中 ， 当加入待检样本后 ， 样本溶解金标垫上或金标微孔中的胶体金标记试剂并与之相互反应 ， 通过毛细作用向前移动 ， 移动至固定抗原或抗体的区域时 ， 待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留 ， 聚焦在测试线 （ Ｔ 线 ） 上 ， 可通过目测观察到显 １ 犜 ／ 犆犐犕犃 ００１２ — ２０１９ 全国团体标准信息平台 色结果 。 图 １ 　 检测卡组成示意图 ３ ． ３ 检测限 　 犾犻犿犻狋狅犳犱犲狋犲犮狋犻狅狀 在本文件规定的试验条件下 ， 使检测卡呈现阳性结果时的样品中吗啡 、 可待因的最低浓度 。 ３ ． ４ 假阴性率 　 犳犪犾狊犲狀犲犵犪狋犻狏犲狉犪狋犲 在本文件规定的试验条件下 ， 达到实际最低检出水平时 ， 阳性样品中检出阴性结果的最大概率 （ 以百分比计 ）， 具体计算参见附录 Ａ 。 ３ ． ５ 假阳性率 　 犳犪犾狊犲狆狅狊犻狋犻狏犲狉犪狋犲 在本文件规定的试验条件下 ， 达到实际最低检出水平时 ， 阴性样品中检出阳性结果的最大概率 （ 以 百分比计 ）， 具体计算参见附录 Ａ 。 ３ ． ６ 灵敏度 　 狊犲狀狊犻狋犻狏犻狋狔 在本文件规定的试验条件下 ， 达到实际最低检出水平时 ， 检出阳性结果的阳性样品数占总阳性样品数的百分比 ， 具体计算参见附录 Ａ 。 ３ ． ７ 特异性 　 狊狆犲犮犻犳犻犮犻狋狔 在本文件规定的试验条件下 ， 达到实际最低检出水平时 ， 检出阴性结果的阴性样品数占总阴性样品 数的百分比 ， 具体计算参见附录 Ａ 。 ４ 　 要求 ４ ． １ 　 工作条件 仪器在下列条件下应能正常工作 ： ２ 犜 ／ 犆犐犕犃 ００１２ — ２０１９ 全国团体标准信息平台 ａ ） 　 环境温度 ： １５℃ ～ ３０℃ 。 ｂ ） 　 工作环境应洁净 ， 操作时避免阳光直射 。 ４ ． ２ 　 外观 检测卡表面光滑平整 ， 颜色均匀一致 ， 纤维膜面无露底 、 起泡 、 麻点 、 起皱 、 刷痕等缺陷 ； 点样孔应洁净 。 ４ ． ３ 　 性能指标 ４ ． ３ ． １ 　 试纸条宽度 试纸条宽度应不小于 ３ｍｍ 。 ４ ． ３ ． ２ 　 层析速度 层析速度应不低于 １０ｍｍ ／ ｍｉｎ 。 ４ ． ３ ． ３ 　 检测限 吗啡 、 可待因均为 ４０ μ ｇ ／ ｋｇ 。 ４ ． ３ ． ４ 　 灵敏度 灵敏度应不小于 ９９％ 。 ４ ． ３ ． ５ 　 特异性 特异性应不小于 ９５％ 。 ４ ． ３ ． ６ 　 假阴性率 假阴性率不大于 １％ 。 ４ ． ３ ． ７ 　 假阳性率 假阳性率不大于 ５％ 。 ４ ． ３ ． ８ 　 重复性 重复性为 １００％ 。 ４ ． ３ ． ９ 　 稳定性 在 ３７℃ 下放置 ６０ｄ ， 或者 ５０℃ 下放置 ２５ｄ ， 检测卡应符合 ４．３．１ ～ ４．３．８ 的要求 。 ４ ． ３ ． １０ 　 批间差异性 取 ３ 个批号检测卡 ， 检测浓度为 ４０ μ ｇ ／ Ｌ 的吗啡 、 可待因样品液 ， 反应结果应一致 ， 显色应均一 。 ５ 　 试验方法 ５ ． １ 　 试验条件 ５ ． １ ． １ 　 试验环境条件 本试验应在 ４．１ 规定的条件下进行 。 ３ 犜 ／ 犆犐犕犃 ００１２ — ２０１９ 全国团体标准信息平台 ５ ． １ ． ２ 　 试剂与材料 ５ ． １ ． ２ ． １ 　 试剂 除另有规定外 ， 本试验所用试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ 规定的二级水 。 甲醇 （ ＣＨ ３ ＯＨ ）： 分析纯 。 乙醇 （ Ｃ ２ Ｈ ５ ＯＨ ）： 分析纯 。 ５ ． １ ． ２ ． ２ 　 仪器与设备 包括 ： ａ ） 　 天平 ： 分度值 ０．０１ｇ 。 ｂ ） 　 离心机 ： 不低于 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ｃ ） 　 振荡器 。 ｄ ） 　 计时器 。 ｅ ） 　 移液器 。 ｆ ） 　 游标卡尺 ： 精度为 ０．０２ｍｍ 。 ５ ． １ ． ３ 　 标准物质 ５ ． １ ． ３ ． １ 　 吗啡 ， 分子式 Ｃ １７ Ｈ １９ ＮＯ ３ ， ＣＡＳ 编号 ５７２７２ ， 或等同可溯源物质 。 ５ ． １ ． ３ ． ２ 　 磷酸可待因 ， 分子式 Ｃ １８ Ｈ ２１ ＮＯ ３ · Ｈ ３ ＰＯ ４ · ３ ／ ２Ｈ ２ Ｏ ， ＣＡＳ 编号 ４１４４４６２６ ， 或等同可溯源物质 。 ５ ． １ ． ４ 　 标准溶液的配制 ５ ． １ ． ４ ． １ 　 吗啡 、 可待因标准储备液 （ １ｍｇ ／ ｍＬ ）： 分别精密称取适量吗啡 、 可待因参考物质 ， 用甲醇溶解 ， 并稀释成浓度为 １ｍｇ ／ ｍＬ 的吗啡 、 可待因标准储备液 。 －２０℃ 避光保存 ， 有效期 １ 年 。 ５ ． １ ． ４ ． ２ 　 吗啡 、 可待因标准中间液 （ １０ μ ｇ ／ ｍＬ ）： 精密移取吗啡 、 可待因标准储备液 （ １ｍｇ ／ ｍＬ ） １ｍＬ 分别置于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇定容至刻度 ， 摇匀 ， 制成浓度为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ 的吗啡 、 可待因标准中间液 。 －２０℃ 避光保存 ， 有效期 ３ 个月 。 ５ ． １ ． ４ ． ３ 　 吗啡 、 可待因溶液 （ ８０ μ ｇ ／ Ｌ ）： 精密移取吗啡 、 可待因标准中间液 （ １０ μ ｇ ／ ｍＬ ） ０．８ｍＬ 分别置于 １０