茶叶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚 残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of hexachlorophene,dinosam and dinex Residues in tea Liquid chromatography -tandem mass spectrometry method ICS 67.140.10 CCS X 55 团 体 标 准 T/CSTEA 000 52-2022 海峡两岸茶业交流协会 发布 2022-10-08发布 2022-10-08实施 全国团体标准信息平台 T/CSTEA 00052—2022 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由福建省产品质量检验研究院提出。 本文件由海峡两岸茶业交流协会归口。 本文件起草单位： 福建省产品质量检验研究院、 武夷星茶 业有限公司、 华祥苑 茶业股份有限公司、 福建品品香茶业有限公司、国家茶叶质量监督检验中心 (福建 )、宁德市产品质量检验所、武夷山市食 品卫生监督检验中心 、熹茗集团 有限公司 、武夷山市 桃渊茗茶叶科学研究所有限公司 、厦门市产品质 量监督检验院、福建农林大学 、福建中检华日食品安全检测有限公司、 睿科集团（厦门）股份有限公 司。 本文件主要起草人：孟鹏、黄芊、段联勃、张雪波、谢基雄、何 丽梅、王征、王兴进、戴明、衷 兴旺、陈巧、林伟琦、林钦、詹重清、刘文菁、林松、晁倩林、 陈劲星、 胡云飞、张建强 、高希、 黄 力群。 全国团体标准信息平台 T/CSTEA 00052—2022 1 茶叶中毒菌酚、戊硝酚、消螨酚残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了绿茶、红茶、白茶、乌龙茶中 毒菌酚、戊硝酚、消螨酚 残留量的 液相色谱-串联质谱法的 测定方法。 本文件适用于绿茶、红茶、白茶、乌龙茶中 毒菌酚、戊硝酚、消螨酚 残留的定性鉴别及定量测定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文 件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有术语和定义。 4 原理 试样用乙腈提取，提取液经分散固相萃取净化，液相色谱 -串联质谱仪检测，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，所有试验用水均为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（CH3CN,CAS号：75-05-8）。 5.1.2 乙腈（CH3CN,CAS 号：75-05-8） ：色谱纯。 5.1.3 甲醇（CH3OH,CAS 号：67-56-1） ：色谱纯。 5.1.4 氯化钠（ NaCl,CAS 号：7647-14-5）。 5.1.5 乙酸钠（ CH3COONa,CAS 号：6131-90-4）。 5.1.6 乙酸（CH3COOH,CAS 号：55896-93-0）。 5.1.7 无水硫酸镁（ MgSO 4,CAS号：7487-88-9）。 5.1.8 乙酸铵（ C2H7NO2,CAS号：631-61-8）。 5.2 溶液配制 5.2.1 水溶液（含 10 mmol/L 乙酸铵， 0.01%乙酸）：称取 0.7708 g 乙酸铵，加入 100 μL乙酸，用超纯水溶 解并稀释至 1000 mL，摇匀。 全国团体标准信息平台 T/CSTEA 00052—2022 2 5.3 标准品 毒菌酚 （Hexachlorophene ，C13H6Cl6O2，CAS：70-30-4)、戊硝酚（ Dinosam，C11H14N2O5，CAS：4097-36-3)、 消螨酚（ Dinex，C12H14N2O5，CAS：131-89-5)，纯度均≥ 95%。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备溶液（ 1000 mg/L ） ：准确称取 10 mg（精确至 0.1mg）标准品， 乙腈溶解 并定容至 10 mL， 避光-18 ℃保存，有效期 1年。 5.4.2 混合标准溶液：吸取一定量的农药标准储备溶液于容量瓶中， 用乙腈（ 5.1.2）定容至刻度 。混合 标准溶液避光 0 ℃～4 ℃保存，有效期 1个月。 5.5 材料 5.5.1 乙二胺 -N-丙基硅烷化硅胶 （PSA）：40 μm～60 μm。 5.5.2 十八烷基硅烷键合硅胶 （C18）：40 μm～60 μm。 5.5.3 石墨化炭黑 （GCB）：40 μm～120 μm。 5.5.4 陶瓷均质子： 2 cm（长）×1 cm（外径），或相当者 。 5.5.5 微孔滤膜（有机相） ： 13 mm × 0.22 μm，或相当者 。 6 仪器与设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 全自动QuEChERS 实验仪。 6.3 分析天平：感量 0.1 mg和0.01 g。 6.4 离心机：转速不低于 4200 r/min 。 6.5 组织捣碎机。 6.6 涡旋混合器。 7 试样制备 7.1 试样制备 取茶叶约 500 g，室温下粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。 7.2 试样贮存 将试样按照测试和备用分别存放。于 -18 ℃条件下保存。 8 分析步骤 8.1 样品前处理 8.1.1 传统QuEChERS 净化法 称取2 g试样（精确至 0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加 10 mL水涡旋混匀，静置 30 min。加入 10 mL乙腈、6 g无水硫酸镁、 1.5 g乙酸钠及 1颗陶瓷均质子， 盖上离心管盖， 剧烈震荡 1 min后4200 r/min 离心5 min。吸取一定量上清液至内含除水剂和净化材料的塑料离心管中（每毫升提取液使用 150 mg无水 硫酸镁、 50 mg C 18、50 mg PSA 和25 mg GCB ），涡旋混匀 1 min。4200 r/min离心5 min，吸取上清液 过微孔滤膜 （5.5.5），用于测定。 全国团体标准信息平台 T/CSTEA 00052—2022 3 8.1.2 自动QuEChERS 净化法 称取2 g试样（精确到 0.01 g）于 50 mL 具塞离心管，放入全自动 QuEChERS 实验仪（ 6.2）中，设置实 验方案（样品中加入 10 mL超纯水及 1颗陶瓷均质子，剧烈震荡 1 min，加入10 mL乙腈，剧烈震荡 3min，再 加入6 g无水硫酸镁、 1.5 g乙酸钠，涡旋混匀后离心。取 4 mL样液至含 600 mg无水硫酸镁、 200 mg C 18、 200 mg PSA 和100 mg GCB 的QuEChERS 净化管中，剧烈振荡 1 min后离心） ，运行实验方案，待仪器停止后取 出净化管，取上清液过微孔滤膜 （5.5.5），用于测定。 8.2 测定条件 8.2.1 液相色谱测定参考条件 液相色谱测定参考条件如下： a）色谱柱： Waters HSS T3 柱（2.1×50 mm，1.8 μm）或相当者； b）流动相： A相为水溶液（ 含10 mmol/L 乙酸铵， 0.01%乙酸），B相为甲醇。流动相梯度条件见表 1； c）流速： 0.4 mL/min ； d）柱温： 40 ℃； e）进样量： 5 μL。 表1 流动相及其梯度条件 时间（ min） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 0 60 40 0.5 60 40 3.0 10 90 5.0 10 90 5.1 60 40 6.5 60 40 8.2.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下： a）离子源类型：电喷雾离子源； b）扫描方式：负模式扫描； c）电喷雾电压： -4500 V； d）离子源温度： 550 ℃； e）雾化气： 50 psi； f）辅助加热气： 50 psi； g）气帘气： 35 psi； h）多反应监测：每种农药分别选择一对定量离子，一对定性离子。每组所有需要检测离子对按照出峰 顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、定量离子对、定性离子对和离子对质谱参数，参见附录 A。 8.3 基质标准工作曲线 精确吸取一定量的混合标准溶液， 逐级用空白基质溶液释成质量浓度为 0.001 mg/L 、0.002 mg/L 、0.005 mg/L、0.01 mg/L 、0.02 mg/L 、0.05 mg/L 的标准工作溶液，供液相色谱 -串联质谱仪测定。以农药定量离 子峰面积为纵坐标，农药标准溶液质量浓度为横坐标，绘制标准 曲线。 8.4 定性及定量 全国团体标准信息平台 T/CSTEA 00052—2022 4 8.4.1 保留时间 被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相