中华人民共和国国家标准 GB5009.89—2016 食品安全国家标准 食品中烟酸和烟酰胺的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.89—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.89—2003《食品中烟酸的测定》、GB5413.15—2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品种烟酸和烟酰胺的测定》和GB/T9695.25—2008《肉与肉制品维生素PP含量测 定》。 本标准与GB5413.15—2010相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中烟酸和烟酰胺的测定”; ———调整了试剂顺序和格式; ———修改并细化了适用于不同食品种类的前处理方法(第一法); ———增加了标准溶液浓度校正方法(第二法); ———重新评估了检出限,增加了定量限。GB5009.89—2016 1 食品安全国家标准 食品中烟酸和烟酰胺的测定 1 范围 本标准规定了食品中烟酸和烟酰胺的测定方法。 本标准第一法为微生物法,适用于各类食品包括以天然食品为基质的强化食品中烟酸和烟酰胺总 量的测定;第二法为高效液相色谱法,适用于强化食品中烟酸和烟酰胺的测定。 第一法 微生物法 2 原理 烟酸(烟酰胺)是植物乳杆菌Lactobacillμsplantarμm(ATCC8014)生长所必需的营养素,在一定 控制条件下,利用植物乳杆菌对烟酸和烟酰胺的特异性,在含有烟酸和烟酰胺的样品中生长形成的光密 度来测定烟酸和烟酰胺的含量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。培养基可购买符合 测试要求的商品化培养基。 3.1 菌种 植物乳杆菌Lactobacillμsplantarμm(ATCC8014),或其他有效标准菌株。 3.2 试剂 3.2.1 盐酸(HCl)。 3.2.2 氢氧化钠(NaOH)。 3.2.3 氯化钠(NaCl)。 3.2.4 浓硫酸(H2SO4)。 3.2.5 乙醇(C2H5OH)。 3.3 试剂配制 3.3.1 盐酸溶液(1mol/L):吸取83mL盐酸,于1000mL烧杯中,加917mL水,混匀。 3.3.2 盐酸溶液(0.1mol/L):吸取盐酸溶液(3.3.1)10mL,加水溶解至100mL。 3.3.3 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取40g氢氧化钠于1000mL烧杯中,加水溶解并稀释至 1000mL,混匀。GB5009.89—2016 2 3.3.4 氢氧化钠溶液(0.1mol/L):吸取氢氧化钠溶液(3.3.3)10mL,加水溶解至100mL。 3.3.5 生理盐水(0.9%):称取9g氯化钠,溶解于1000mL水中,分装10mL于试管中,121℃灭菌 15min,备用。 3.3.6 乙醇溶液(25%):量取200mL无水乙醇与800mL水混匀。 3.3.7 硫酸溶液(1mol/L):于2000mL烧杯中先注入700mL水,吸取56mL硫酸沿烧杯壁缓慢倒 入水中,用水稀释到1000mL。 3.4 培养基 3.4.1 乳酸杆菌琼脂培养基:可按A.1配制。 3.4.2 乳酸杆菌肉汤培养基:可按A.2配制。 3.4.3 烟酸测定用培养基:可按A.3配制。 注:一些商品化合成培养基效果良好,商品化合成培养基按标签说明进行配制。 3.5 标准品 烟酸(C6H5NO2):纯度≥99.5%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 3.6 标准溶液配制 3.6.1 烟酸标准储备液(0.1mg/mL):精确称取50.0mg烟酸标准品,用乙醇溶液溶解并移至500mL 容量瓶中,定容,混匀于2℃~4℃冷藏。此溶液每毫升相当于100μg烟酸。 3.6.2 烟酸标准中间液(1μg/mL):准确吸取1.0mL烟酸标准储备液(3.6.1)置于100mL棕色容量瓶 中,用乙醇溶液稀释并定容至刻度,混匀于2℃~4℃冷藏。此溶液每毫升相当于1μg烟酸。 3.6.3 烟酸标准工作液(100ng/mL):准确吸取5.00mL烟酸标准中间液(3.6.2)置于50mL容量瓶 中,用水稀释定容至刻度,混匀于2℃~4℃冷藏。此溶液每毫升相当于100ng烟酸。 4 仪器和设备 4.1 天平:感量分别为0.01g和0.1mg。 4.2 均质设备:用于试样的均质化。 4.3 恒温培养箱:36℃±1℃。 4.4 涡旋振荡器。 4.5 压力蒸汽消毒器:121℃(0.10MPa~0.12MPa)。 4.6 离心机:转速≥2000r/min。 4.7 pH计:精度±0.01。 4.8 分光光度计。 4.9 超净工作台。 4.10 超声波振荡器。 注:玻璃仪器使用前,用活性剂(月桂磺酸钠或家用洗涤剂加入到洗涤用水中即可)对硬玻璃测定管及其他必要的 玻璃器皿进行清洗,清洗之后烘干,于170℃干热3h后使用。 5 分析步骤