中华人民共和国国家标准 GB5009.84—2016 食品安全国家标准 食品中维生素B1的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.84—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.84—2003《食品中硫胺素(维生素B1)的测定》、GB5413.11—2010《食品安 全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定》、GB/T7628—2008《谷物中维生素B1的测定》、 GB/T9695.27—2008《肉与肉制品 维生素B1含量测定》。 本标准与GB/T5009.84—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中维生素B1的测定”; ———增加了高效液相色谱法,作为第一法,将荧光光度法作为第二法; ———修改了检出限的表达,增加了方法的定量限; ———增加了人造沸石预处理中氯离子的定性鉴别方法; ———增加了溴甲酚绿为指示剂时,溶液颜色的变化特征; ———删去了图1(反应瓶)和图2(盐基交换管)结构图; ———增加了人造沸石以湿重表示时的称取量。GB5009.84—2016 1 食品安全国家标准 食品中维生素B1的测定 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法、荧光光度法测定食品中维生素B1的方法。 本标准适用于食品中维生素B1含量的测定。 第一法 高效液相色谱法 2 原理 样品在稀盐酸介质中恒温水解、中和,再酶解,水解液用碱性铁氰化钾溶液衍生,正丁醇萃取后,经 C18反相色谱柱分离,用高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 正丁醇(CH3CH2CH2CH2OH)。 3.1.2 铁氰化钾[K3Fe(CN)6]。 3.1.3 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.4 盐酸(HCl)。 3.1.5 乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。 3.1.6 冰乙酸(CH3COOH)。 3.1.7 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.8 五氧化二磷(P2O5)或者氯化钙(CaCl2)。 3.1.9 木瓜蛋白酶:应不含维生素B1,酶活力≥800U(活力单位)/mg。 3.1.10 淀粉酶:应不含维生素B1,酶活力≥3700U/g。 3.2 试剂配制 3.2.1 铁氰化钾溶液(20g/L):称取2g铁氰化钾,用水溶解并定容至100mL,摇匀。临用前配制。 3.2.2 氢氧化钠溶液(100g/L):称取25g氢氧化钠,用水溶解并定容至250mL,摇匀。 3.2.3 碱性铁氰化钾溶液:将5mL铁氰化钾溶液与200mL氢氧化钠溶液混合,摇匀。临用前配制。 3.2.4 盐酸溶液(0.1mol/L):移取8.5mL盐酸,加水稀释至1000mL,摇匀。 3.2.5 盐酸溶液(0.01mol/L):量取0.1mol/L盐酸溶液50mL,用水稀释并定容至500mL,摇匀。 3.2.6 乙酸钠溶液(0.05mol/L):称取6.80g乙酸钠,加900mL水溶解,用冰乙酸调pH为4.0~ 5.0之间,加水定容至1000mL。经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。GB5009.84—2016 2 3.2.7 乙酸钠溶液(2.0mol/L):称取27.2g乙酸钠,用水溶解并定容至100mL,摇匀。 3.2.8 混合酶溶液:称取1.76g木瓜蛋白酶、1.27g淀粉酶,加水定容至50mL,涡旋,使呈混悬状液体, 冷藏保存。临用前再次摇匀后使用。 3.3 标准品 维生素B1标准品:盐酸硫胺素(C12H17ClN4OS·HCl)),CAS:67-03-8,纯度≥99.0%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 维生素B1标准储备液(500μg/mL):准确称取经五氧化二磷或者氯化钙干燥24h的盐酸硫胺 素标准品56.1mg(精确至0.1mg),相当于50mg硫胺素、用0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至100 mL,摇匀。置于0℃~4℃冰箱中,保存期为3个月。 3.4.2 维生素B1标准中间液(10.0μg/mL):准确移取2.00mL标准储备液,用水稀释并定容至 100mL,摇匀。临用前配制。 3.4.3 维生素B1标准系列工作液:吸取维生素B1标准中间液0μL、50.0μL、100μL、200μL、400μL, 800μL,1000μL,用水定容至10mL,标准系列工作液中维生素B1的浓度分别为0μg/mL,0.0500μg/mL, 0.100μg/mL,0.200μg/mL,0.400μg/mL,0.800μg/mL,1.00μg/mL。临用时配制。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪,配置荧光检测器。 4.2 分析天平:感量为0.01g和0.1mg。 4.3 离心机:转速≥4000r/min。 4.4 pH计:精度0.01。 4.5 组织捣碎机(最大转速不低于10000r/min)。 4.6 电热恒温干燥箱或高压灭菌锅。 5 分析步骤 5.1 试样的制备 5.1.1 液体或固体粉末样品:将样品混合均匀后,立即测定或于冰箱中冷藏。 5.1.2 新鲜水果、蔬菜和肉类:取500g左右样品(肉类取250g),用匀浆机或者粉碎机将样品均质后, 制得均匀性一致的匀浆,立即测定或者于冰箱中冷冻保存。 5.1.3 其他含水量较低的固体样品:如含水量在15%左右的谷物,取100g左右样品,用粉碎机将样品 粉碎后,制得均匀性一致的粉末,立即测定或者于冰箱中冷藏保存。 5.2 试样溶液的制备 5.2.1 试液提取 称取3g~5g(精确至0.01g)固体试样或者10g~20g液体试样于100mL锥形瓶中(带有软质塞 子),加60mL0.1mol/L盐酸溶液,充分摇匀,塞上软质塞子,高压灭菌锅中121℃保持30min。水解 结束待冷却至40℃以下取出,轻摇数次;用pH计指示,用2.0mol/L乙酸钠溶液调节pH至4.0左右, 加入2.0mL(可根据酶活力不同适当调整用量)混合酶溶液,摇匀后,置于培养箱中37℃过夜(约 16h);将酶解液全部转移至100mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,离心或者过滤,取上清液备用。