中华人民共和国国家标准 GB5009.245—2016 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.245—2016 1 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定 1 范围 本标准规定了食品中聚葡萄糖的测定方法。 本标准适用于食品中添加的聚葡萄糖的测定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 聚葡萄糖[(C6H10O5)n] 由葡萄糖、山梨糖醇和柠檬酸(或磷酸)按一定比例混合,在高温下加热聚合并精制、干燥而成的多 聚体,平均聚合度12。属于可溶性膳食纤维。 3 原理 食品中聚葡萄糖经热水浸提、超滤离心后,滤液经酶解去除淀粉、果聚糖等干扰物后,再用离子色 谱-脉冲安培检测器定量测定聚葡萄糖含量。 4 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 氢氧化钠溶液(50%):色谱纯,离子色谱专用。 4.1.2 冰乙酸(CH3COOH)。 4.1.3 三水合乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。 4.1.4 无水乙酸钠(CH3COONa)。 4.1.5 果聚糖酶(fructanase):≥2000U/mL。 4.1.6 淀粉葡糖苷酶(Amyloglucosidase):≥3260U/mL(可溶性淀粉);≥200U/mL(对硝基酚-β-麦 芽糖苷,p-NP-βmaltoside)。 4.1.7 异淀粉酶(Isoamylase):≥1000U/mL。 4.2 试剂配制 4.2.1 乙酸溶液(0.2mol/L):准确吸取1.2mL冰乙酸,用水稀释至100mL。 4.2.2 乙酸钠溶液(0.2mol/L):准确称取2.72g三水合乙酸钠,用水溶解并稀释至100mL。 4.2.3 乙酸盐缓冲液(pH为4.5):将28mL乙酸溶液(0.2mol/L)与22mL乙酸钠溶液(0.2mol/L)混GB5009.245—2016 2 合,用水稀释至100mL。 4.2.4 混合酶液:分别吸取680μL果聚糖酶、84μL淀粉葡糖苷酶、17μL异淀粉酶混合,加乙酸盐缓 冲液稀释至20mL。混合酶液临用现配。 4.3 流动相 4.3.1 流动相A(含0.15mol/L氢氧化钠):准确吸取15.7mL氢氧化钠溶液(50%),用预先脱气的水 稀释2L,惰性气体保护。 4.3.2 流动相B(含0.15mol/L氢氧化钠,0.50mol/L乙酸钠):准确称量41g无水乙酸钠(或68g三 水合乙酸钠),用流动相A溶解定容至1L,混匀,过0.45μm膜,脱气。 注:配制流动相时,去离子水需预先脱气0.5h,定容后的流动相混匀时倒置混匀5~6次,不可剧烈振摇。配好的 流动相沿储液瓶壁缓缓倒入,脱气0.5h后惰性气体保护。 4.4 参考物质 聚葡萄糖[(C6H10O5)n]:纯度大于90%,CAS:68424-04-4。 注:为保证结果的准确性,如能确定添加的聚葡萄糖来源,应选用食品中添加的聚葡聚糖同源的参考物质,并达到 FCC级。 4.5 参考物质溶液的配制 4.5.1 参考物质储备液(2.00mg/g):准确称取0.20g聚葡萄糖参考物质(精确至0.0001g)至已预先 称重的100mL具螺口塞的试样瓶中(精确至0.001g)。加入约100g预热至80℃的去离子水,拧紧螺 口塞,涡旋振荡30s,将试样瓶置于80℃水浴10min,每隔5min振荡一次,以使聚葡萄糖充分溶解,取 出试样瓶,冷却至室温,称重(精确至0.001g)。参考物质储备液于4℃保存,有效期1个月。 4.5.2 参考物质中间液:分别精确称量10.0g、7.50g、5.00g、3.75g、2.50g、1.50g参考物质储备液(精 确至0.0001g)加水至20.0g(精确至0.0001g),得到浓度为1.000mg/g、0.750mg/g、0.500mg/g、 0.375mg/g、0.250mg/g、0.150mg/g的参考物质中间液。 4.5.3 参考物质工作液:取2mL离心管,称量(精确至0.0001g),精确称量参考物质中间液0.20g(精 确至0.0001g)转移至已称重的离心管中,加入酶混合液0.8mL,称量(精确至0.0001g),振荡混合均 匀,于50℃水浴60min,沸水浴10min,取出,冰浴5min,于10000r/min离心10min。上清液过 0.22μm滤膜,进样分析,得到浓度分别为200μg/g、150μg/g、100μg/g、75.0μg/g、50.0μg/g、 30.0μg/g的参考物质工作液系列,进样分析。以此6点参考物质工作液上机获得工作曲线,其回归方 程的决定系数(R2值)应不小于0.995。 5 仪器与设备 5.1 分析天平:感量分别为1mg,0.1mg。 5.2 恒温水浴箱:控温精度±1℃。 5.3 高速离心机:转速≥10000r/min。 5.4 涡旋振荡器。 5.5 微量可调移液器:20μL~200μL、200μL~1000μL。 5.6 针筒式过滤器:孔径0.22μm。 5.7 超滤离心设备:100000Da分子截留,聚醚砜膜,0.5mL容积。 5.8 磁力搅拌器:带搅拌子。 5.9 离子色谱仪:配备脉冲安培检测器、梯度泵。GB5009.245—2016 3 6 操作步骤 6.1 试样处理 6.1.1 固体试样:研磨、粉碎,分析前密闭保存,避免水分变化。 6.1.2 液体试样:测定前需混合摇匀。 6.2 聚葡萄糖提取 6.2.1 固体试样:取100mL具塞试样瓶,加入1粒磁力搅拌子,盖上螺口塞,称量(精确至0.001g),记 为m1。准确称取一定量试样(约含聚葡萄糖0.05g,精确至0.0001g,记为m2)至试样瓶中,加100mL 预热至80℃的水,磁力搅拌30s,80℃水浴10min,每5min磁力搅拌30s。取出试样瓶冷却至室温 后称量(精确至0.001g),记为m3。 6.2.2 液体试样(饮料、液态奶等):取100mL具塞试样瓶,称量(精确至0.001g),记为m1。准确吸取 一定量试样(约含聚葡萄糖0.05g,精确至0.0001g,记为m2)至试样瓶中,加100mL水,振荡混合均 匀,称量(精确至0.001g),记为m3。 6.2.3 适量吸取样液至2.0mL的离心管中,10000r/min离心15min,取上清液过0.22μm滤膜,取 0.45mL滤液加入1.5mL带有分子截留膜的离心管中,于10000r/min超滤离心30min。注意观察 是否离心完全及离心液的澄清度,如截留膜上方留有样液或离心液混浊,可加大转速、延长离心时间,或 增加稀释倍数(F)。 6.3 酶解 6.3.1 取2mL离心管,称量(精确至0.0001g),记为m4。 6.3.2 吸取0.2mL超滤离心液加入离心管中,称量(精确至0.0001g),记为m5;加入酶混合液 0.8mL,称量(精确至0.0001g),记为m6;振荡混合均匀,于50℃水浴60min,沸水浴10min,取出, 冰浴5min,于10000r/min离心10min。上清液过0.2μm滤膜,进样分析。上清液需在72h内检测。 6.4 色谱参考条件 检测条件见附录B。 6.5 分析结果的表述 试样中聚葡萄糖含量按式(1)计算: X=ρ×F×c×m6-m4 m5-m4×m3-m1 m2×100 106…………………………(1) 式中: X ———试样中聚葡萄糖的含量,单位为克每百克(g/100g); ρ———由标准曲线计算得到的聚葡萄糖的浓度,单位为微克每克(μg/g); F———稀释倍数; c———聚葡萄糖参考物质的纯度,%; m6———离心管、酶解样液、混合酶液的总质量,单位为克(g); m4———空离心管质量,单位为克(g); m5———离心管、用于酶解样液总质量,单位为克(g); m3———加水后试样瓶总质量,单位为克(g); m1———试样瓶总质量,单位为克(g);