中华人民共和国国家标准 GB5009.240—2016 食品安全国家标准 食品中伏马毒素的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.240—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T25228—2010《粮油检验 玉米及其制品中伏马毒素含量测定 免疫亲和柱净 化高效液相色谱法和荧光光度法》、SN/T1958—2007《进出口食品中伏马毒素B1残留量检测方法 酶 联免疫吸附法》、SN/T1572—2005《进出口粮谷中伏马毒素检验方法 高效液相色谱法》。 本标准将以上标准进行了整合,主要修订如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中伏马毒素的测定”; ———伏马毒素种类增加为伏马毒素B1、B2、B3三种; ———增加了免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱法作为第一法; ———增加了高效液相色谱-串联质谱联用法作为第二法; ———取消荧光光度法; ———改变了样品提取溶液; ———改变了免疫亲和柱净化-柱前衍生高效液相色谱法流动相的组成。GB5009.240—2016 1 食品安全国家标准 食品中伏马毒素的测定 1 范围 本标准规定了玉米及其制品中伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3(以下简写为FB1、FB2、FB3) 的测定方法。 本标准第一法为免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱法,第二法为高效液相色谱-串联质谱联 用法,第三法为免疫亲和柱净化-柱前衍生高效液相色谱法,适用于玉米及其制品中伏马毒素的测定。 第一法 免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱法 2 原理 样品用乙腈-水溶液提取,经稀释后过免疫亲和柱净化,去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干 扰物质。经高效液相色谱分离后柱后邻苯二甲醛衍生,荧光检测,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.3 乙酸(CH3COOH)。 3.1.4 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.5 氯化钠(NaCl)。 3.1.6 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 3.1.7 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 3.1.8 氯化钾(KCl)。 3.1.9 硼砂(Na2B4O7·10H2O)。 3.1.10 2-巯基乙醇(C2H6OS)。 3.1.11 邻苯二甲醛(OPA,C8H6O2)。 3.1.12 吐温-20(C58H114O26)。 3.2 溶液配制 3.2.1 甲酸水溶液(0.1%):吸取1mL甲酸,加入到999mL水中,混合均匀。 3.2.2 乙腈-水溶液(50+50):分别量取500mL乙腈和500mL水,混合均匀。 3.2.3 乙腈-水溶液(20+80):分别量取200mL乙腈和800mL水,混合均匀。GB5009.240—2016 2 3.2.4 甲醇-乙酸溶液(98+2):吸取2mL乙酸,加入到98mL甲醇中,混合均匀。 3.2.5 氢氧化钠溶液(1mol/L):准确称取氢氧化钠4.0g,溶于100mL水,混合均匀。 3.2.6 磷酸盐缓冲液(PBS):称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾,用 980mL水溶解,用盐酸调整pH至7.4,用水稀释至1000mL,混合均匀。 3.2.7 吐温-20/PBS溶液(0.1%):吸取1mL吐温-20,加入磷酸盐缓冲液(3.2.6)并稀释至1000mL, 混合均匀。 3.2.8 硼砂溶液(0.05mol/L,pH10.5):称取硼砂19.1g,溶于980mL水中,用氢氧化钠溶液调pH至 10.5,用水稀释至1000mL,混合均匀。 3.2.9 衍生溶液:称取2.0g邻苯二甲醛,溶于20mL甲醇中,用硼砂溶液(0.05mol/L,pH10.5)(3.2.8)稀 释至500mL,加入2-巯基乙醇500μL,混匀,装入棕色瓶中,现用现配。 3.3 标准品 3.3.1 伏马毒素B1(FB1,C34H59NO15),纯度≥95%,或有证标准溶液。 3.3.2 伏马毒素B2(FB2,C34H59NO14),纯度≥95%,或有证标准溶液。 3.3.3 伏马毒素B3(FB3,C34H59NO14),纯度≥95%,或有证标准溶液。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备溶液(0.1mg/mL):分别准确称取FB1、FB2、FB3各0.01g(精确至0.0001g)至小烧杯 中,用乙腈-水溶液(3.2.2)溶解,并转移至100mL容量瓶中,定容至刻度。此溶液密封后避光-20℃保 存。有效期6个月。 3.4.2 混合标准溶液:准确吸取FB1标准储备液1mL、FB2和FB3标准储备液0.5mL至同一10mL 容量瓶中,加乙腈-水溶液(3.2.2)稀释至刻度,得到FB1浓度为10μg/mL、FB2和FB3浓度为5μg/mL 的混合标准溶液。再稀释10倍,得到FB1浓度为1μg/mL、FB2和FB3浓度为0.5μg/mL的混合标准 溶液。此溶液密封后避光4℃保存,有效期6个月。 3.4.3 混合标准工作溶液:准确吸取混合标准溶液,用乙腈-水溶液(3.2.3)稀释,配制成FB1浓度依次 为20ng/mL、80ng/mL、160ng/mL、240ng/mL、320ng/mL、400ng/mL,FB2和FB3浓度依次为 10ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、120ng/mL、160ng/mL、200ng/mL的系列混合标准工作溶液。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪,带荧光检测器。 4.2 柱后衍生系统。 4.3 天平:感量0.01g和0.0001g。 4.4 均质器。 4.5 振荡器。 4.6 氮吹仪。 4.7 离心机:转速≥4000r/min。 4.8 免疫亲和柱(柱容量≥5000ng,FB1柱回收率≥80%)(柱容量及柱回收率验证方法参见附录B)。 注:对于每个批次的亲和柱在使用前需进行质量检验。 4.9 微孔滤膜:0.45μm,有机型。 5 分析步骤 5.1 样品制备 将固体样品按四分法缩分至1kg,全部用谷物粉碎机磨碎并细至粒度小于1mm,混匀分成2份作