中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B 4 7 8 9 . 3 8 - 2 0 1 2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布 2 0 1 2 - 0 5 - 1 7 发布 2 0 1 2 - 0 7 - 1 7 实施 G B 4 7 8 9 . 3 8 - 2 0 1 2 I 前 言 本 标准 代替 G B / T 4 7 8 9 . 3 8 - 2 0 0 8 《 食品 卫生 微生 物学 检验 大 肠杆 菌计 数 》 。 本 标准 与 G B / T 4 7 8 9 . 3 8 - 2 0 0 8 相 比， 主要 变化 如下 ： —— 修 改了 标准 的中 文名 称； —— 修 改了 培养 基和 试剂 ； —— 将 “ 第 二法 大 肠杆 菌 V R B - M U G 平 板计 数法 ” 改 为 “ 大 肠埃 希氏 菌平 板计 数法 （第 二法 ） ” ； —— 删 除了 “ 第 三法 大 肠杆 菌 P e t r i f i l m T M 测 试片 计数 法 ” ； —— 修 改了 附录 A 。 G B 4 7 8 9 . 3 8 - 2 0 1 2 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数 1 范 围 本 标准 规定 了食 品中 大肠 埃希 氏菌 （ E s c h e r i c h i a c o l i ） 计数 的方 法。 本 标准 适用 于食 品中 大肠 埃希 氏菌 的计 数 ， 其 中 大 肠埃 希氏 菌平 板计 数法 （ 第 二法 ） 不 适 用于 贝类 产 品 。 2 术 语和 定义 2 . 1 大 肠埃 希氏 菌 E s c h e r i c h i a c o l i 大 肠杆 菌 广 泛存 在于 人和 温血 动物 的肠 道中 ， 能 够在 4 4 . 5 ℃ 发 酵乳 糖产 酸产 气 ， I M V i C （ 靛 基质 、 甲 基红 、 V P 试 验 、 柠 檬酸 盐 ） 生 化试 验为 ＋＋ －－ 或－ ＋－ －的 革兰 氏阴 性杆 菌 。 以 此作 为粪 便污 染指 标来 评价 食品 的 卫生 状况 ，推 断食 品中 肠道 致病 菌污 染的 可能 性。 2 . 2 最 可能 数 基 于泊 松分 布的 一种 间接 计数 方法 ， 简称 为 M P N 。 3 设 备和 材料 除 微生 物实 验室 常规 灭菌 及培 养设 备外 ，其 他设 备和 材料 如下 ： a ） 恒 温培 养箱 ： 3 6 ℃ ± 1 ℃ ； b ） 冰 箱： 2 ℃ ～ 5 ℃ ； c ） 恒 温水 浴箱 ： 4 4 . 5 ℃ ± 0 . 2 ℃ ； d ） 天 平： 感量 为 0 . 1 g ； c ） 均 质器 ； d ） 振 荡器 ； e ） 无 菌吸 管： 1 m L （ 具 0 . 0 1 m L 刻 度 ） 、 1 0 m L （ 具 0 . 1 m L 刻 度） 或微 量移 液器 及吸 头； f ） 无 菌锥 形瓶 ：容 量 5 0 0 m L ； g ） 无 菌培 养皿 ：直 径 9 0 m m ； h ） p H 计 或 p H 比 色管 或精 密 p H 试 纸 ； i ） 菌 落计 数器 ； j ） 紫 外灯 ：波 长 3 6 0 n m ～ 3 6 6 n m ， 功率 ≤ 6 W 。 4 培 养基 和试 剂 4 . 1 月 桂基 硫酸 盐胰 蛋白 胨（ L S T ） 肉汤 ：见 附录 A 中 A . 1 。 4 . 2 E C 肉 汤（ E . c o l i b r o t h ） ： 见附 录 A 中 A . 2 。 4 . 3 蛋 白胨 水： 见附 录 A 中 A . 3 。 G B 4 7 8 9 . 3 8 - 2 0 1 2 2 4 . 4 缓 冲葡 萄糖 蛋白 胨水 [ 甲 基红 ( M R ) 和 V - P 试 验用 ] ： 见附 录 A 中 A . 4 。 4 . 5 西 蒙氏 柠檬 酸盐 培养 基： 见附 录 A 中 A . 5 。 4 . 6 磷 酸盐 缓冲 液： 见附 录 A 中 A . 6 。 4 . 7 伊 红美 蓝（ E M B ） 琼脂 ：见 附录 A 中 A . 7 。 4 . 8 营 养琼 脂斜 面： 见附 录 A 中 A . 8 。 4 . 9 结 晶紫 中性 红胆 盐琼 脂（ V R B A ） ： 见附 录 A 中 A . 9 。 4 . 1 0 结 晶紫 中性 红胆 盐 - 4 - 甲 基伞 形酮 - β - D - 葡 萄糖 苷 琼 脂（ V R B A - M U G ） ： 见附 录 A 中 A . 1 0 。 4 . 1 1 革 兰氏 染色 液： 见附 录 A 中 A . 1 1 。 4 . 1 2 K o v a c s 靛 基质 试剂 ：见 附录 A 中 A . 1 2 。 4 . 1 3 无 菌 1 m o l / L N a O H ： 见附 录 A 中 A . 1 3 。 4 . 1 4 无 菌 1 m o l / L H C l ： 见附 录 A 中 A . 1 4 。