中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B 4 7 8 9 . 1 3 — 2 0 1 2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布 2 0 1 2 - 0 5 - 1 7 发布 2 0 1 2 - 0 7 - 1 7 实施 G B 4 7 8 9 . 1 3 — 2 0 1 2 I 前 言 本 标准 代替 G B / T 4 7 8 9 . 1 3 — 2 0 0 3 《 食品 卫生 微生 物学 检验 产 气荚 膜梭 菌检 验 》 。 本 标 准 与 G B / T 4 7 8 9 . 1 3 — 2 0 0 3 相 比 ， 主 要 变 化 如 下 ： —— 修 改 了 标 准 的 中 文 名 称 ； —— 修 改了 样品 制备 过程 ； —— 修 改 了 培 养 基 与 试 剂 ； —— 修 改了 操作 步骤 ； —— 修 改了 菌数 计算 部分 ； —— 增 加了 附 录 A 。 G B 4 7 8 9 . 1 3 — 2 0 1 2 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验 1 范 围 本 标准 规定 了食 品中 产 气荚 膜梭 菌（ C l o s t r i d i u m p e r f r i n g e n s ） 的检 验方 法 。 本 标准 适用 于 食 品中 产气 荚膜 梭菌 的 检 验。 2 设 备和 材料 除 微生 物实 验室 常规 灭菌 及培 养设 备外 ，其 他设 备和 材料 如下 ： a ） 恒 温培 养箱 ： 3 6 ℃ ± 1 ℃ ； b ） 冰 箱： 2 ℃ ～ 5 ℃ ； c ） 恒 温水 浴箱 ： 5 0 ℃ ± 1 ℃ ， 4 6 ℃ ± 0 . 5 ℃ ； d ） 天 平： 感量 0 . 1 g ； e ） 均 质器 ； f ） 显 微镜 ： 1 0 × ～ 1 0 0 × ； g ） 无 菌吸 管： 1 m L （ 具 0 . 0 1 m L 刻 度 ） 、 1 0 m L （ 具 0 . 1 m L 刻 度 ） 或 微量 移液 器及 吸头 ； h ） 无 菌 试 管 ： 1 8 m m × 1 8 0 m m ； i ） 无 菌培 养皿 ：直 径 9 0 m m ； j ） p H 计 或 p H 比 色管 或精 密 p H 试 纸 ； k ） 厌 氧培 养装 置 。 3 培 养基 和试 剂 3 . 1 胰 胨 - 亚 硫酸 盐 - 环 丝氨 酸 （ T S C ） 琼 脂： 见 附录 A 中 A . 1 。 3 . 2 液 体硫 乙醇 酸盐 培养 基 （ F T G ） ： 见 附录 A 中 A . 2 。 3 . 3 缓 冲动 力 - 硝 酸盐 培养 基： 见 附录 A 中 A . 3 。 3 . 4 乳 糖 - 明 胶培 养基 ： 见 附录 A 中 A . 4 。 3 . 5 含 铁牛 乳 培 养基 ： 见 附录 A 中 A . 5 。 3 . 6 0 . 1 % 蛋 白 胨水 ： 见 附录 A 中 A . 6 。 3 . 7 革 兰氏 染色 液： 见 附录 A 中 A . 7 。 3 . 8 硝 酸盐 还原 试剂 ： 见 附录 A 中 A . 8 。 3 . 9 缓 冲甘 油 - 氯 化钠 溶液 ： 见 附录 A 中 A . 9 。 4 检 验程 序 G B 4 7 8 9 . 1 3 — 2 0 1 2 2 产 气荚 膜梭 菌检 验程 序见 图 1 。 图 1 产 气荚 膜梭 菌检 验程 序 5 操 作步 骤 5 . 1 样 品制 备 5 . 1 . 1 样 品采 集后 应尽 快检 验， 若不 能及 时检 验， 可在 2 ℃ ～ 5 ℃ 保 存； 如 8 h 内 不能 进行 检验 ，应 以 无 菌操 作称 取 2 5 g （ m L ） 样品 加入 等量 缓冲 甘油 - 氯 化钠 溶液 （液 体样 品应 加双 料 ） ， 并尽 快 至 于 - 6 0 ℃ 低 温冰 箱中 冷冻 保存 或加 干冰 保存 。 5 . 1 . 2 以 无菌 操作 称取 2 5 g （ m L ） 样品 放入 含有 2 2 5 m L 0 . 1 % 蛋 白胨 水（ 如为 5 . 1 . 1 中 冷冻 保存 样品 ， 室 温解 冻后 ，加 入 2 0 0 m L 0 . 1 % 蛋 白胨 水） 的均 质袋 中， 在拍 击式 均质 器上 连续 均质 1 m i n ～ 2 m i n ； 或 置 于盛 有 2 2 5 m L 0 . 1 % 蛋 白胨 水的 均质 杯中 ， 8 0 0 0 r / m i n ～ 1 0 0 0 0 r / m i n 均 质 1 m i n ～ 2 m i n ， 作 为 1 : 1 0 稀 释 液 。 5 . 1 . 3 以 上述 1 : 1 0 稀 释液 按 1 m L 加 0 . 1 % 蛋 白胨 水 9 m L 制 备 1 0 - 2 ～ 1 0 - 6 的 系列 稀释 液。 检 样 2 5 g ( m L ) 检 样 + 2 2 5 m L 0 . 1 % 蛋 白胨 水 均 质、 稀释 1 0 - 1 ～ 1 0 - 6 稀 释液 各 1 m L + T S C 琼 脂混 合 厌 氧培 养， 3 6 ℃ ± 1 ℃ 、 2 0 h ～ 2 4 h ， 黑色 菌落 计数 任 选黑 色菌 落 5 个 ，分 别接 种 F T G 培 养基 确 证试 验 镜 检形 态 乳 糖 - 明 胶 动 力 - 硝 酸盐 牛 奶发 酵 报 告