(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210696707.5 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 南方海洋科学与工程广东省实验室 （湛江） 地址 524006 广东省湛江市霞山区文体路 一号 （图书馆） (72)发明人 赵娜　张博　朱春华　邓秋霞　 王秋梅　朱旭枫　黄洋　茹笑影　 胡琴　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 罗新 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01)C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 高体鰤性别差异指示标签microRNA及试剂 盒与应用 (57)摘要 本发明公开了高体鰤性别差异指示标签 microRNA及试剂盒与应用， 所述高体鰤性别差异 指示标签microRNA的核酸序列如Seq  ID No.1所 示。 所述microRNA的核 酸序列是根据高体鰤血清 外泌体中small  RNA设计的， 扩展了血清外泌体 的应用， 取高体鰤的血清不会对高体鰤鱼体造成 不可恢复的创伤， 可 以减少高体鰤的损失。 所述 用于高体鰤性别检测的microRNA， 鉴定准确度 高， 具有生产价 值和市场价 值。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图2页 CN 114934121 A 2022.08.23 CN 114934121 A 1.一种高体鰤性别差异指示标签microRNA， 其特征在于： 所述高体鰤性别差异指示标 签microRNA的核酸序列如Seq  ID No.1所示。 2.与权利要求1所述的高体鰤性别差异指示标签microRNA相 关的生物材料， 其特征在 于： 所述生物材料为1)～4)中任一种： 1)权利要求1所述的microRNA前体； 2)权利要求1所述的microRNA模拟物； 3)编码权利要求1所述的microRNA或1)中所述的microRNA前体的DNA分子； 4)含有3)中所述的DNA分子的表达盒、 重组载体或转基因细胞。 3.用于扩增权利要求1所述的高体鰤性别差异指示标签microRNA的引物组。 4.根据权利要求3所述的引物组， 其特征在于： 所述引物组包括上游引物和下游引物， 所述上游引物的核苷酸序列如Seq  ID No.2所示； 所述下游引物的核苷酸如Seq  ID No.3所 示。 5.一种试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒包括权利要求1所述的高体鰤性别差异指示标 签microRNA、 权利要求2所述的生物材 料或， 权利要求3或4所述的引物组。 6.根据权利 要求5所述的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒中还包括 内参基因oni ‑let‑ 7a的检测试剂； 优选地， 所述检测试剂包括特异性引物组和oni ‑let‑7a逆转录引物； 更优选 地， 所述oni ‑let‑7a逆转录引物的核苷 酸序列如Seq  ID No.4所示， 所述特异性引物组包括 如Seq ID No.5所示的正向引物核苷酸序列和如Seq  ID No.6所示的反向引物核苷酸序列。 7.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒中还包括abu ‑miR‑30b的逆 转录引物， 所述abu ‑miR‑30b的逆转录引物的核酸序列如Seq  ID No.7所示。 8.权利要求1所述的高体鰤性别差异指示标签microRNA、 权利要求2所述的生物材料、 权利要求3或4所述的引物组， 或权利要求5 ‑7任一项所述的试剂盒在制备高体鰤性别检测 试剂中的应用。 9.权利要求1所述的miRNA、 权利要求2所述的生物材料、 权利要求3或4所述的引物组， 或权利要求5 ‑7任一项所述的试剂盒在高体鰤养殖中的应用。 10.一种检测高体鰤性别的方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 通过权利要求1所述的miRNA、 权利要求2所述的生物材料、 权利要求3或4所述的引物 组， 或权利要求5 ‑7任一项所述的试剂盒对高体鰤性别进行检测。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114934121 A 2高体鰤性别差异指示标签microRNA及 试剂盒与应用 技术领域 [0001]本发明涉及鱼类生物相关技术领域， 尤其是涉及高体鰤性别差异指示标签 microRNA及试剂盒与应用。 背景技术 [0002]高体鰤(Seriola  dumerili)是一种肉质好， 生长速度快， 营养价值高的世界性深 远海经济 鱼类。 高体鰤是雌雄异体鱼类， 但表型没有显著的性别二态性， 因此难以从鱼体表 面直接判断鱼的性别。 此外， 在人工养殖条件下， 高体鰤表现出严重的生殖功能障碍， 由于 高体鰤性别鉴定困难， 极大影响了高体鰤的催产繁育工作， 严重制约了高体鰤的工厂化养 殖。 [0003]外泌体(exosomes)是一种直径在30 ‑150nm之间， 具有脂质双分子层结构的细胞外 囊泡(extracellular  vesicles,EVs)， 其广泛分布于动物体液内。 外泌体 内含有多种大小 为18‑26个核苷 酸、 高度保守的micr oRNAs， 其可作为重要的调节分子参与细胞间的通讯， 成 为诊断和 生理过程监测的潜在生物标志物， 在生物分子标记应用中发挥重要作用。 在海水 鱼类中外泌体来源的microRNAs作为生物标志物的研究相 对较少， 目前没有通过高体鰤外 泌体中microRNAs来 鉴定高体鰤性别的报道。 [0004]因此， 开发一种通过高体鰤外泌体中microRNAs来鉴定高体鰤性别， 具有理论意 义、 生产价 值和市场价 值。 发明内容 [0005]本发明所要解决的第一个技 术问题是： [0006]提供一种高体鰤性别差异指示标签microRNA。 [0007]本发明所要解决的第二个技 术问题是： [0008]提供一种高体鰤性别差异指示标签microRNA相关的生物材 料。 [0009]本发明所要解决的第三个技 术问题是： [0010]提供用于扩增所述的高体鰤性别差异指示标签microRNA的引物组。 [0011]本发明所要解决的第四个技 术问题是： [0012]提供一种试剂盒。 [0013]本发明所要解决的第五个技 术问题是： [0014]提供一种检测高体鰤性别的方法。 [0015]本发明还提出所述的高体鰤性别差异指示标签microRNA、 所述的生物材料、 所述 的引物组， 所述的试剂盒在制备高体鰤性别检测试剂中的应用。 [0016]本发明还提出所述的miRNA、 所述 的生物材料、 所述 的引物组， 或所述 的试剂盒在 高体鰤养殖中的应用。 [0017]本发明还提出所述高体鰤性别检测的microRNA的筛选方法在海鱼性别鉴定方面 的应用。说　明　书 1/10 页 3 CN 114934121 A 3