(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211074089.7 (22)申请日 2022.09.02 (71)申请人 中山大学附属第一医院 地址 510000 广东省广州市中山 二路58号 (72)发明人 尹军强　沈靖南　黄冠予　刘伟海　 付艺伟　张嘉俊　 (74)专利代理 机构 广州广典知识产权代理事务 所(普通合伙) 44365 专利代理师 万志香 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 骨肉瘤检测标记 物及其应用 (57)摘要 本发明提供了骨肉瘤检测的生物标记物， 其 为LACTB基因， 且存在错义突变p.Met5Leu/c.13A >C、 p.Lys255Gln/c.763A>C、 p.Arg469Lys/ c.1406G>A和/或同义突变p.Ser475Ser/c.1425G >A、 p.Asp355Asp/c.1065T>C中的一种和/或多种 位点突变。 还提供了所述生物标记物的应用和相 应检测试剂盒。 与其他肿瘤不同， 骨肉瘤中LA CTB 蛋白发挥了致癌的作用， 并且发生五个位点的突 变。 所述标记物可用于早期预防、 诊断、 治疗， 为 骨肉瘤的诊 治提供了新的方案 。 权利要求书1页 说明书5页 附图9页 CN 115354078 A 2022.11.18 CN 115354078 A 1.一种骨肉瘤检测的生物标记物， 其特征在于， 其为LACTB基因， 且存在错义突变 p.Met5Leu/c.13A>C、 p.Lys255Gln/c.763A>C、 p.Arg469Lys/c.1406G>A同义突变 p.Ser475Ser/ c.1425G>A、 p.Asp3 55Asp/c.1065T>C中的至少一种位 点突变。 2.根据权利 要求1所述的骨肉瘤检测的生物标记物， 其特征在于， 其为LACTB基因， 且存 在错义突变的p.Met5Leu/c.13A>C和/或p.Arg469Lys/c.1406G>A； 进一步优选为存在错义 突变p.Met5Leu/c.13A>C、 p.Lys255Gln/c.763A>C、 p.Arg469Lys/c.1406G>A同义突变 p.Ser475Ser/ c.1425G>A、 和p.Asp3 55Asp/c.1065T>C。 3.一种骨肉瘤检测的生物标记物， 其特征在于， 权利要求1或2所述的位点突变的LACTB 基因所表达的LACTB蛋白。 4.检测权利要求1或2所述的LACTB基因的表达量或者检测权利 要求3所述LACTB蛋白含 量的试剂在制备骨肉瘤检测试剂盒中的应用。 5.一种检测骨肉瘤的试剂盒， 其特征在于， 包括有检测待测样本中权利要求1或2所述 的LACTB基因突变或表达量的试剂。 6.一种检测骨肉瘤的试剂盒， 其特征在于， 包括有检测待测样本中权利要求3所述 LACTB蛋白含量的试剂。 7.根据权利要求5或6所述的检测骨肉瘤的试剂盒， 其特征在于， 包括采用检测方法为 PCR、 荧光定量PCR、 RT—PCR、 测序法、 液相芯片法的试剂。 8.根据权利要求5或6所述的检测骨肉瘤的试剂盒， 其特征在于， 包括采用检测方法酶 联免疫法、 蛋白质芯片的试剂。 9.权利要求1或2所述的存在位点突变的LACTB基因作为生物标记物在制备检测骨肉瘤 的试剂盒中的应用， 其特征在于， 其应用的方法包括检测待检测样本中权利要求1或2所述 LACTB基因表达是否上调或者权利要求3所述 LACTB蛋白水平量。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 还包括检测CEP55、 CDK4、 EEF1A2、 Gli2、 SCD1、 SREBF1、 TCF 7L2、 SRSF3蛋白水平中的至少一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115354078 A 2骨肉瘤检测标记物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术和临床医学领域， 具体涉及一种骨肉瘤检测标记物及其应 用。 背景技术 [0002]骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是一种儿童和 青少年高发的肿瘤， 给独生子女家庭造 成了巨大威胁， 并给社会带来巨大的经济损失。 经过 临床医学工作者的努力， 目前规范新辅 助化疗和广泛切除五年生存率接近60％。 由于骨肉瘤的多形性， 导致其早期在临床难以诊 断， 进而导致其死亡率高。 亟需建立骨肉瘤早期诊断体系， 并探索对应的新的治疗 靶点。 [0003]增强子就是基因组上的一段D NA序列， 可以与转录因子相互配合增强基因的表达。 例如， 宫颈癌细胞HeLa细胞中编码β 球蛋白基因上游的增强子， 可以使β 球蛋白基因的表达 增强200倍。 然而近年来研究表明细胞中存在增强子的加强版， 即超级增强子(super   enhancer)。 超级增强子的控制力涵盖多种癌症谱系， 癌细胞通过组装自己的超级增强子， 过度生产恶性致癌基因， 表现出增生、 入侵和转移的癌症标志特征。 因此， 对骨肉瘤超级增 强子的研究， 可以发现肿瘤细胞中高度表达的致癌基因， 有望在疾病诊断与治疗方面发挥 重要作用。 [0004]LACTB是来源于青霉素结合蛋白(penicillin  binding proteins， PBPs)/β ‑内酰 胺酶蛋白家族的一种线 粒体膜间蛋白， 存在于所有的脊椎动物中， 参与肽聚糖的合成。 研究 表明β‑内酰胺酶丝氨 酸样蛋白LACTB在膜间空间内， 形成纤维状纤维线 粒体膜， 直接或间接 调控线粒体磷脂代谢， 而线粒体磷脂代谢与细胞增殖和肿瘤形成密切相关， 提示β ‑内酰胺 酶样丝氨 酸蛋白LACTB的表达参与肿瘤的增殖分化。 在大部 分肿瘤中临床病理分期越高， 线 粒体内β‑内酰胺酶丝氨酸样蛋白LACTB表达越低。 例如在乳腺癌患者中， 只有34 ‑42％的人 在其乳腺组织中检测到β ‑内酰胺酶丝氨酸样蛋白LACTB， 而正常乳腺的则是10 0％。 [0005]在未转化的细胞中， LACTB沉默不足以引起转化， 但当结合致癌基因RAS或MYC的表 达时， 它会导致体内肿 瘤的形成。 这说明线粒体蛋白LACTB可改变线粒体脂质代谢和 重组、 调节癌细胞的分化状态研究表明在肿瘤实体组织中， LACTB表达降低了肿瘤细胞生长速率， 促进了肿瘤 细胞凋亡， 有时甚至可使初始癌灶的肿瘤 细胞完全消灭回归正常。 [0006]然而根据发明人数年的临床和研究经验， LACTB在骨肉瘤中呈现出与已有研究相 反的结果， 可以围绕其建立骨肉瘤的早期诊断体系。 发明内容 [0007]本发明的目的在于克服现有生物标记物难以诊断早期骨肉瘤的不足， 提供一种骨 肉瘤检测的生物标记 物及其应用。 [0008]本发明的第一方面， 是提供了一种骨肉瘤检测的生物标记 物。 [0009]一种骨肉瘤检测的生物标记物， 其为LACTB基因， 且存在错义突变p.Met5Leu/ c.13A>C、 p.Lys255Gln/c.763A>C、 p.Arg469Lys/c.1406G>A、 同义突变p.Ser475Ser/说　明　书 1/5 页 3 CN 115354078 A 3