(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210733270.8 (22)申请日 2022.06.27 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114807361 A (43)申请公布日 2022.07.29 (73)专利权人 中国中医科学院中药研究所 地址 100700 北京市东城区东 直门内南小 街16号 (72)发明人 梁爱华　王连嵋　鲜中　 (74)专利代理 机构 北京精金石知识产权代理有 限公司 1 1470 专利代理师 朱宝莉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01)G01N 33/68(2006.01) 审查员 陈果 (54)发明名称 马兜铃酸毒性分子标志 物及其应用 (57)摘要 本发明提供用 于检测分子标志物的试剂在 制备诊断马兜铃酸毒性的产品中的应用， 所述分 子标志物为KRT13、 KRT17、 KRT23中的一种或多 种。 本发明提供了用于马兜铃酸毒性早期检测的 新标志物， 为马兜铃酸的安全性检测提供了更为 快捷简便的方法。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114807361 B 2022.09.02 CN 114807361 B 1.用于检测分子标志物的试剂在制备检测马兜铃酸毒性的产品中的应用， 其特征在 于， 所述分子标志 物为KRT13、 KRT17、 KRT23中的一种或多种。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的试剂为特异性结合KRT13、 KRT17、 KRT23的试剂。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的试剂为特异性结合KRT13、 KRT17、 KRT23的核酸的试剂。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的试剂为检测KRT13、 KRT17、 KRT23表 达量的试剂。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的试剂为特异性扩增KRT13、 KRT17、 KRT23基因的引物和特异性识别KRT13、 KRT17、 KRT23  mRNA的探针。 6.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的产品为特异性分析KRT13、 KRT17、 KRT23的芯片或试剂盒。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述芯片包括： 固相载体， 以及附着于其上 的特异性识别KRT13、 KRT17、 KRT23的探针。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒还包括核酸抽提试剂、 聚合酶 链反应试剂、 显色剂或指示剂、 核酸分析 软件、 使用说明书中的一种或多种。 9.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒包括识别KRT13、 KRT17、 KRT23 的抗体。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于， 所述的试剂盒为EL ISA试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807361 B 2马兜铃酸 毒性分子标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药 领域， 具体涉及马兜铃酸毒性分子标志 物及其应用。 背景技术 [0002]马兜铃酸 （Arist olochic acids， AAs） 是一类硝基菲类羧酸， 具有肾脏毒性和致癌 性。 已报道的大量马兜铃酸肾病 （AAN） 病例中， 有 些AAN患者后续发生尿路上皮癌和膀胱癌。 泌尿系统致癌性的发现使马兜铃酸被列为 Ⅰ类致癌物。 AAs是一类植物 次生代谢产物， 广泛 存在于马兜铃科植物中。 马兜铃科植物共有500多种， 在亚洲地区被作为传统药物用于治疗 多种疾病。 中国地区的马兜铃科植物主要有4属共70余种， 其中大多数是药用植物， 例如马 兜铃、 细辛、 广防己、 关木通、 天仙藤等， 常作为中药材配伍使用， 具有止咳平喘、 祛风止痛和 清热活血等功效。 现在存于2020版药典中的马兜铃科植物仅有细辛一种， 细辛临床应用广 泛， 主要用于治疗过敏性哮喘、 鼻炎、 咳嗽以及新冠病毒肺炎等症。 除了入汤剂 外， 大量的中 成药制剂中亦含有细辛。 《中 国药典》 收载有50种含细辛品种。 很多品种极为常用， 如 小青龙 颗粒、 儿童清肺口服液、 小儿咳喘颗粒、 痧气 体丸、 鼻渊舒口服液、 小儿肺闭宁片、 辛芩颗粒、 九味羌活片、 川芎茶调片、 鼻炎片、 胃炎宁冲剂、 人参再造丸、 正 天丸、 杜仲壮骨丸等， 其中不 乏儿童常用药。 在 含马兜铃、 土木香、 木通、 防己、 寻骨风等药材的中成药中均检测到了马兜 铃酸成份。 为了避免药物中的马兜铃酸在实际应用中带来的毒性伤害， 对马兜铃酸毒性进 行早期诊断， 对于其 安全性监测极为重要。 [0003]角蛋白 （kerat ins， KRTs） 是一类细胞骨架结构蛋白， 分子量大小为40 ‑76kDa， 主要 分布于是上皮细胞和内皮细胞。 KRTs在各种癌症中的异常表达使其成为鉴别诊断和转移状 态的生物标志物。 研究表明， 肿瘤细胞中的KRTs不仅是上皮细胞的分子标记， 同时还参与调 解细胞增殖、 存活、 转移侵 袭等生理过程。 [0004]KRT13是一种I型角蛋白， 常与II型角蛋白4配对， 存在 于口腔、 扁桃体、 喉、 食管、 下 生殖道和移行性尿 路上皮的非角质化分层鳞状上皮的基底上层。 KRT13的表达受钙、 核受体 （如维甲酸和1α， 25 ‑二羟维生素D3， 以及雌激素或选择性雌激素受体等） 的调节。 KRT13的点 突变与常染色体显性遗传病海绵 痣相关。 在舌癌、 头颈癌、 宫颈癌、 口腔癌、 卵巢癌、 乳 腺癌、 膀胱癌、 食管癌和前列腺癌中均发现KRT13表达失调。 [0005]KRT17是一种I型角蛋白， 在口腔癌、 口咽癌、 喉癌、 甲状腺癌、 食管癌、 肺癌、 乳腺 癌、 胃癌、 结直肠癌、 胆管癌、 胰腺癌、 肾癌、 尿道上皮癌、 宫颈癌、 子宫内膜癌以及皮肤癌中 均表达上调。 Kr t17是癌基因， 参与肿瘤生长、 转移与预后等 生理过程。 [0006]KRT23是一种I型角蛋白， 目前在肿瘤发生中的作用报道包括胃癌、 结肠癌、 肝癌、 前列腺癌等。 [0007]现有技术中尚未公开角蛋白作为马兜铃酸毒性分子标志 物相关的应用。 发明内容 [0008]为了解决上述问题， 本发明发现KRT13、 KRT17、 KRT23可作为马兜铃酸毒性分子标说　明　书 1/6 页 3 CN 114807361 B 3