(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210700780.5 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 上海市农业科 学院 地址 201400 上海市奉贤区金齐路10 00号 申请人 杭州市农业科 学研究院 (72)发明人 聂智星　朱为民　陈建瑛　宋云鹏　 (74)专利代理 机构 南京华恒专利代理事务所 (普通合伙) 32335 专利代理师 裴素艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 辣椒细胞质雄性不育育性恢复基因InDel标 记、 特异性引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种辣椒细胞质 雄性不育育 性恢复基因InDel标记、 特异性引物及其应用， 所 述InDel标记包括P06gInDel ‑79和P06gInDel ‑ 81， 位于辣椒参考基因组Zunla ‑1 V2.0的6号染 色体上， 对应物理位置分别为Chr06:215,419, 754.215,420,003和Chr06:215,498,219.215, 498,426， 用于检测上述InDel标记的引物分别为 P06gInDel ‑79‑F/P06gInDel ‑79‑R和P06gInDel ‑ 81‑F/P06gInDel ‑81‑R。 利用本发明中的InDel标 记和筛选方法， 可在种质资源中快速筛选新的辣 椒保持系和恢复系， 从而加快辣椒杂交种选育进 程。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图1页 CN 114921586 A 2022.08.19 CN 114921586 A 1.一种辣椒细胞质雄性不育育性恢复基因InDel标记， 其特征在于， 所述InDel标记包 括P06gInDel ‑79和P06gInDel ‑81， 其位于辣椒参考基因组Zu nla‑1 V2.0的6号染色体上， 对 应物理位置分别为Chr06:215,419,754..215,420,003和Chr06:215,498,219..215,498, 426。 2.权利要求1所述的辣椒细胞质雄性不育育性恢复基因InDel标记的特异性引物， 其特 征在于， 所述特异性引物的序列如下 所示： InDel标记P0 6gInDel‑79： 上游引物P0 6gInDel‑79‑F： 5′ ‑GAGGGTCTTCCTATGTTTGTCC‑3′， SEQ ID NO.1； 下游引物P0 6gInDel‑79‑R： 5′ ‑TGCACGAATGAACAGTAAACCA‑3′， SEQ ID NO.2； InDel标记P0 6gInDel‑81： 上游引物P0 6gInDel‑81‑F： 5′ ‑TCATTCCCTTTTTCCAGCTCTG ‑3′， SEQ ID NO.3； 下游引物P0 6gInDel‑81‑R： 5′ ‑ACAGGGGTGTTATGGGTGATT‑3′， SEQ ID NO.4。 3.一种试剂盒， 包 含权利要求2所述的特异性引物。 4.权利要求1所述的InDel标记、 权利要求2所述的特异性引物或权利要求3所述的试剂 盒在辣椒分子标记辅助育种中的应用。 5.权利要求1所述的InDel标记、 权利要求2所述的特异性引物或权利要求3所述的试剂 盒在筛选辣椒保持系和恢复系中的应用。 6.一种筛选辣椒保持系和恢 复系的方法， 其特征在于， 所述方法包含应用权利要求1所 述的InDel标记、 权利要求2所述的特异性引物或权利要求3所述的试剂盒的步骤。 7.根据权利要求6所述的筛选辣椒保持系和恢复系的方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： （1） 提取待测辣椒自交系的基因 组DNA； （2） 以步骤 （1） 提取的基因组DNA作 为模板， 利用权利 要求2所述的特异性引物或权利 要 求3所述的试剂盒进行PCR扩增； （3） 将扩增产物进行电泳检测； （4） 如果两个InDel标记扩增产物的带型同时与不育系HZ1A的带型相同， 则 待测辣椒自 交系为保持系； 如果两个InDel标记扩增产 物的带型同时与恢复系HZ1C的带型相同， 则待测 辣椒自交系为恢复系。 8.根据权利要求7所述的筛选辣椒保持系和恢复系的方法， 其特征在于， 步骤 （4） 中， P06gInDel ‑79在不育系HZ1A中的扩增产物电泳后出现2条条带， 而在恢复系HZ1C中多出1条 200bp左右的条带； P06gInDel ‑81在不育系HZ1A中的扩增产物电泳后只有1条条带， 而在恢 复系HZ1C中多出1条120bp左右的条 带。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921586 A 2辣椒细胞质雄性不育 育性恢复基因InDel标记、 特异性引物及 其应用 技术领域 [0001]本发明属于辣椒育种领域， 尤其涉及一种辣椒细胞质雄性不育 （Cytoplasmic   male sterility， CMS） 育性恢复基因I nDel标记、 特异性引物及其应用。 背景技术 [0002]中国是全球最大的辣椒生产国， 其中90%以上辣椒品种是杂交种。 由CMS系、 保持系 和恢复系组成的 “三系”杂交制种体系是辣椒杂交种制种的重要 方法之一。 该方法可以显著 降低生产成本， 提高杂交种纯度。 “三系”杂交种的育性稳定是其大面积 推广的重要保证， 恢 复系中的基因对其 起着关键作用。 [0003]在辣椒“三系”杂交育种中， 恢复系和不育系是杂交种选育的基础。 新的恢复系和 不育系的筛选通常通过与已有CMS系测交， 观察后代F1的育性进行确定。 这至少需要2个生 长季节的时间， 且F1的育性可能会存在环境条件的影响， 通过此种方法的选育效率较低， 准 确性需要在不同的生长环境中验证。 近年来， 分子标记辅助选择逐渐在育种实践中得到有 效应用。 在精细定位恢复基因的基础上， 获得与育性恢复基因共分离的分子标记， 可在种质 资源中筛选新的保持系和恢复系， 利用新筛选出的保持系作为父本， 对原CMS系 连续回交4 代以上， 即可获得新的不育系。 通过分子标记辅助选择可以节省育种时间， 加快辣椒杂交种 选育进程。 发明内容 [0004]发明目的： 为了解决上述问题， 本发明的目的在于提供一种辣椒细胞质雄性不育 育性恢复基因InDel标记、 特异性引物及其应用， 该InDel标记可用于辣椒分子标记辅助育 种， 筛选新的保持系和恢复系。 [0005]技术方案： 本发明的目的可通过如下技 术方案实现： 一种辣椒细胞质雄性不育育性恢复基因InDel标记， 所述InDel标记包括 P06gInDel ‑79和P06gInDel ‑81， 位于辣椒参考基因组Zu nla‑1 V2.0的6号染色体上， 对应物 理位置分别为C hr06: 215,419,754. .215,420,0 03和Chr06: 215,498,219. .215,498,426 。 [0006]所述的辣椒细胞质雄性不育育性恢复基因InDel标记的特异性引物， 所述特异性 引物的序列如下 所示： InDel标记P0 6gInDel‑79： 上游引物P0 6gInDel‑79‑F： 5′ ‑GAGGGTCTTCCTATGTTTGTCC‑3′， SEQ ID NO.1； 下游引物P0 6gInDel‑79‑R： 5′ ‑TGCACGAATGAACAGTAAACCA‑3′， SEQ ID NO.2； InDel标记P0 6gInDel‑81： 上游引物P0 6gInDel‑81‑F： 5′ ‑TCATTCCCTTTTTCCAGCTCTG ‑3′， SEQ ID NO.3； 下游引物P0 6gInDel‑81‑R： 5′ ‑ACAGGGGTGTTATGGGTGATT‑3′， SEQ ID NO.4。 [0007]一种试剂盒， 包 含所述的特异性引物。说　明　书 1/3 页 3 CN 114921586 A 3