(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210672731.5 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 上海交通大 学 地址 200240 上海市闵行区东川路80 0号 (72)发明人 崔大祥　刘彬　 (74)专利代理 机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 312 25 专利代理师 王颖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR 试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种 胃癌治疗耐药与复发预后 的miRNA检测PCR试剂盒， 包 括用于检测4种miRNA 标志物的PCR引物， 所述的4种miRNA标志物分别 为miRNA‑23b、 miR‑21‑3p、 miR‑223和miR ‑146b‑ 5p。 与现有技术相比， 本发明通过对胃癌患者外 周血中外泌体4种miRNA标志物如miRNA ‑23b， miR‑21‑3p， miR‑223与miR  146b‑5p进行表达水 平检测， 来判断胃癌患者是否存在对顺铂， 阿霉 素， 紫杉醇耐药的风险， 判断胃癌患者是否存在 复发与转移的风险。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115029439 A 2022.09.09 CN 115029439 A 1.胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在于， 包括用于检测4种 miRNA标志物的PCR引物， 所述的4种miRNA标志物分别为miRNA ‑23b、 miR‑21‑3p、 miR‑223和 miR‑146b‑5p。 2.根据权利要求1所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 所述的miRNA ‑23b的PCR引物如下： F:GGGTTCCTGGCATGCTGAT T， R:TCGTGGTTGCGTGGTAATCC。 3.根据权利要求1所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 所述的miR ‑21‑3p的PCR引物如下： F:CTCAACTGGTGTCGTG GAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAGC CCA， R:ACACTC CAGCTGGGCAACACCAGTCGATG。 4.根据权利要求1所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 所述的miR ‑223的PCR引物如下： F:CCACGCTCCGTGTATTTGAC， R:CCGCACTTGGGGTATTTGAC。 5.根据权利要求1所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 所述的miR ‑146b‑5p的PCR引物如下： F:CTCAACTGGTGTCGTG GAGTCGGCAATTCAGTTGAGCAGC CTAT， R:ACACTC CAGCTGGGTGAGAACTGAATTCCAT。 6.根据权利要求1所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 还包括用于标记反向引物的荧 光磁性纳米粒子编码微球。 7.根据权利要求6所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 所述的荧 光磁性纳米粒子编码微球利用反向微乳法制备 得到。 8.根据权利要求6所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 所述的荧 光磁性纳米粒子编码微球用去离 子水进行稀释， 浓度为10 0 μg/ml。 9.根据权利要求1所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒， 其特征在 于， 还包括PCR buffer， 反转录酶， Taq酶和dNTP混合液。 10.根据权利要求1～9任一项所述的胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂 盒， 其特征在于， 以GAP DH作为内对照。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115029439 A 2胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及纳米生物检测技术领域， 具体涉及一种胃癌治疗耐药与复发预后的 miRNA检测PCR试剂盒。 背景技术 [0002]肿瘤普遍存在耐药现象， 其是肿瘤临床化疗失败和复发的主要原因之一， 即使使 用分子靶向药物几个月后也会产生耐药， 导致疗效降低或无效， 这成为临床上最棘手的问 题之一。 数据显示， 大约3 0％～80％的肿瘤 细胞在化疗期间产生耐药性。 [0003]胃癌是常见的恶性肿瘤。 手术后进行常规的化疗是治疗的一个必经过程。 但是， 胃 癌患者由于 胃癌的类型不同， 可能存在对常用的化疗药物耐药， 如果快速明确胃癌患者是 否对化疗药物耐药， 具有巨大 的临床需求。 化疗药物如顺铂， 阿霉素， 紫杉醇是常规用于胃 癌治疗的药物。 如何判断化疗药物是否耐药， 胃癌治疗是否存在复发， 判断预后， 具有现实 的临床需求。 [0004]循环系统miRNA作为肿瘤诊断标志物的研究越来越广泛， 而这些miRNA也被包裹于 外泌体中。 在胃癌发展的机理上， 外泌体的促癌机制多种多样， 如外泌体可促进胃癌转移前 肿瘤微环境的形成， 包括免疫抑制、 基质重塑、 血管生成和上皮 ‑间充质转化(Epithelial ‑ mesenchymal  transition,EMT)。 通过外泌体传导促癌分子(尤其miRNA之类的小分子)， 是 胃癌发生耐药、 转移等进展的重要机理， 也构成了治疗的潜在靶点。 鉴于miRNA在人类疾病 中的重要作用， 迫切需要研发敏锐的miRNA检测方法， 应用于疾病的诊断、 治疗以及预后。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种胃癌治疗耐药与复发预后的miRNA检测PCR试剂盒。 [0006]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现： 一种胃癌治疗耐药与复发预后的 miRNA检测PCR试剂盒， 包括用于检测4种miRNA标志物的PCR引物， 所述的4种miRNA标志物分 别为miRNA ‑23b、 miR‑21‑3p、 miR‑223和miR‑146b‑5p。 [0007]胃癌患者血浆外泌体中miRNA ‑23b的表达水平与胃癌的复发及预后密切相关， 外 泌体中miR ‑21‑3p高表达赋予胃癌细胞顺铂耐药性， 外泌体中miR ‑223高表达赋予胃癌细胞 阿霉素的化疗耐药性。 mi R 146b‑5p与早期胃癌的肿瘤浸润深度呈正相关， 与紫杉醇耐药相 关， 与转移预后相关。 4个miRNA标志物的同步检测， 可以判断胃癌患者是否存在顺铂、 阿霉 素、 紫杉醇耐药， 是否存在复发与转移的预后。 [0008]优选地， 所述的miRNA ‑23b的PCR引物如下： [0009]F(也称正向引物或上游引物):G GGTTCCTGGCATGCTGAT T， [0010]R(也称反向引物或下游引物):TCGTG GTTGCGTGGTAATCC。 [0011]优选地， 所述的miR ‑21‑3p的PCR引物如下： [0012]F:CTCAACTGGTGTCGTG GAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAGC CCA， [0013]R:ACACTC CAGCTGGGCAACACCAGTCGATG。说　明　书 1/4 页 3 CN 115029439 A 3