(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210710330.4 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 上海交通大 学 地址 200240 上海市徐汇区华 山路1954 号 申请人 上海纳米技 术及应用国家工程研究 中心有限公司 (72)发明人 崔大祥　张春雷　倪健　刘彬　 田静　陈晓敏　崔明青　 (74)专利代理 机构 上海东亚专利商标代理有限 公司 31208 专利代理师 董梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 胃癌M7G相关基因的RT-PCR检测试剂盒 (57)摘要 本发明涉及生物医药领域， 涉及一种胃癌 M7G相关基因的RT ‑PCR检测试剂盒及其应用。 本 发明的基因检测试剂盒， 包括检测胃癌M7G相关 基因的引 物、 量子点、 反转录酶、 Taq酶、 dNTPs或 者PCR缓冲液， 所述的胃癌M 7G相关基因包 括但不 限于： DCPS、 GEMIN5、 METTL1、 EIF4E1B或者 NUDT10。 能够高效、 准确地检测M 7G相关基因的存 在及其甲基化水平， 操作简单、 检测快速、 检测成 本低。 该试剂盒不仅可实现对胃癌M7G相关基因 的表达水平检测， 而且其检测结果可为预测胃癌 预后和选 择靶向治疗药物提供依据， 具有很好的 应用前景。 权利要求书2页 说明书7页 序列表3页 附图1页 CN 115074441 A 2022.09.20 CN 115074441 A 1.一种基因检测试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂盒包括检测胃癌M7G相关基因的引 物， 所述的胃癌M7G相关基因包括但不限于： DCP S、 GEMIN5、 METTL1、 EIF4E1B或者 NUDT10。 2.根据权利要求1所述的基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述的基因检测试剂 盒包括以 下物质的一种或者多种： 量子点、 反转录酶、 Taq酶、 dNTPs或者PCR缓冲液。 3.根据权利要求2所述的基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述的量子点为修饰有与反向 引物互补的寡核苷酸TAGC的CdSe量子点； 或者， 所述的引物选自以下引物对： 检测DCPS基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示； 检测GEMIN5基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.3和SEQ  ID NO.4所示； 检测METTL1基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示； 检测EIF4E1B基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8所示； 或者 检测NUDT10基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.9和SEQ  ID NO.10所示。 4.权利要求1所述的基因检测试剂 盒的应用， 其特征在于， 使用所述的基因检测试剂 盒 检测胃癌M7G相关基因的存在或者表达量， 或者使用胃癌M7G相关基因的定量结果辅助预后 判断和选择靶向治疗药物。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 使用所述的试剂盒进行RT ‑PCR扩增， 包括反 转录和扩增的步骤； RT‑PCR扩增按照如下 条件进行： ①37℃反转录15分钟， 95℃反应3 0秒； ②95℃变性5 ‑30秒， 60℃退火15 ‑30秒， 72℃延伸20 ‑30秒， 进行3 0‑40个循环。 6.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 使用胃癌M7G相关基因的定量结果辅助预后 判断和选择靶向治疗药物的计算公式为： DCP S+METTL1+GEMIN5‑EIF4E1B‑NUDT10=P。 7.如权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 当P x 0.21 > = 10, 预示胃癌 患者预后很好； 当P x 0.21<10， 预示胃癌 患者预后差 。 8.一种M7G相关基因的基因检测试 方法， 其特 征在于， 所述的方法包括以下步骤： （1） 获得检测胃癌M7G相关基因所需的引物， （2） 制备寡核苷酸 修饰的CdSe量子点； （3） 利用核酸 提取试剂盒提取样本中的RNA， 定量； （4） 配制RT ‑PCR反应体系， 所述的RT ‑PCR反应体系中包括反转录酶、 DNA聚合酶、 上述步 骤 （1）‑（3） 中的引物、 寡核苷酸 修饰的CdSe量子点和提取的RNA； （5） 将上述 步骤 （4） 配制的RT ‑PCR反应体系混匀， 进行扩增； （6） 对上述 步骤 （5） 获得的RT ‑PCR扩增产物进行定量分析， 定量分析的计算公式为： DCPS+METTL1+GEMIN5‑EIF4E1B‑NUDT10=P； 所述的胃癌M7G相关基因包括但不限于： DCP S、 GEMIN5、 METTL1、 EIF4E1B或者 NUDT10。 9.如权利要求8所述的M7G相关基因的基因检测试 方法， 其特 征在于， 检测胃癌M7G相关基因所需的引物是扩增胃癌M7G相关基因的引物对； 制备寡核苷酸修饰的CdSe量子点的方法包括： 采用水热合成法制备CdSe量子点， 通过 调控体积制备不同粒径的C dSe量子点， 合成巯基修饰的与反向引物互补的寡核苷酸TAGC，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115074441 A 2然后与上述获得的CdSe量子点反应， 制备寡核苷酸 修饰的CdSe量子点； 所述的样本包括但不限于： 人类细胞、 组织、 血 液、 唾液、 尿液或者腹水； 所述的RT ‑PCR反应体系中包括Taq酶、 dNTPs、 PCR缓冲液或者d dH2O中的一个或者几个； 所述的RT ‑PCR扩增包括反转录和扩增的步骤； 或者 根据定量分析的结果进行计算并进行预后判断， 从而为预测胃癌预后和选择靶向治疗 药物提供依据： 当P  x 0.21 > = 10， 预示胃癌患者预后很好； P  x 0.21<10， 预示胃癌患者 预后差。 10.如权利要求9所述的M7G相关基因的基因检测试 方法， 其特 征在于， 检测胃癌M7G相关基因所需的引物如下： 检测DCPS基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示； 检测GEMIN5基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.3和SEQ  ID NO.4所示； 检测METTL1基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示； 检测EIF4E1B基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8所示； 检测NUDT10基因的引物对的序列如SEQ  ID NO.9和SEQ  ID NO.10所示； 制备寡核苷酸修饰的CdSe量子点时， 采用合成的5种不同粒径的CdSe量子点制备寡核 苷酸修饰的CdSe量子点， 将获得 的寡核苷酸修饰的CdSe量子点分离纯化后， 加入ddH2O， 备 用； RT‑PCR扩增时， 以GAPDH作为内对照， 按照如下条件进行扩增： ①37℃反转录15分钟， 95 ℃反应30秒； ②95℃变性5 ‑30秒， 60℃退火15 ‑30秒， 72℃延伸20 ‑30秒， 进行30 ‑40个循环； 或者 将胃癌M7G相关基因的定量检测结果作为预测胃癌预后和选择靶向治疗药物的辅助判 断依据： 当P  x 0.21 > = 10， 建议常规的化疗； 当P  x 0.21<10， 建议靶向药物5 ‑氮杂胞嘧 啶核苷治疗。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115074441 A 3