(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210584510.2 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 清华大学 地址 100084 北京市海淀区清华园 (72)发明人 常智杰　任芳丽　王银银　林玉婷　 (74)专利代理 机构 北京三友知识产权代理有限 公司 11127 专利代理师 张培源　庞东成 (51)Int.Cl. G01N 33/574(2006.01) G01N 33/68(2006.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 确定癌症手术切缘的方法、 应用和试剂盒 (57)摘要 本发明公开了利用CREPT确定癌症手术切缘 的方法、 应用和试剂盒。 其中， 本发明通过CREPT 的免疫组化染色等手段确定CREPT阳性细胞的区 域， 以识别原位复发风险高的组织， 指导癌症手 术切缘。 本发 明发现在癌症细胞通过分泌肿瘤外 泌体促进正常细胞癌化的过程中， 伴随着CREPT 表达水平升高。 而CREPT作为促癌蛋白， 其升高则 意味着细胞处于癌化和/或复发的高风险状态。 因此， 本发明通过对CREPT水平的检测可以实现 对癌变风险高的组织区域的识别。 权利要求书2页 说明书19页 序列表4页 附图8页 CN 115112892 A 2022.09.27 CN 115112892 A 1.一种确定癌症手术切缘的方法， 所述方法包括： 在来自受试者的癌旁组织中检测标志物的表达水平， 所述标志物是CREPT(肿瘤细胞周 期相关及表达增强蛋白)及其同一性为8 5％以上、 90％以上、 95％以上、 8％以上或99％以上 的突变体； 并将所述标志物的表达水平与对照用样品中的表达水平进行比较， 所述对照用样品来 自手术受试者的正常组织或健康受试者， 其中， 与对照用样品中的表达水平相比， 所述癌旁组织中CREPT表达水平升高10％以 上、 20％以上、 5 0％以上、 10 0％以上或20 0％以上时， 被确定为需要切除的组织。 2.如权利要求1所述的方法， 其中， 与对照用样品中的表达水平相比， 手术受试者的不 典型增生组织和基因表达谱发生癌前改变但病理学尚未改变的癌旁 组织中CREPT表达水平 升高。 3.如权利要求1所述的方法， 其中， 所述癌是实体癌， 例如宫颈癌、 乳腺癌、 卵巢癌、 黑色 素瘤、 结肠癌。 4.如权利要求1所述的方法， 其中， 所述标志物的表达水平通过以下方式中的一种或多 种检测： 免疫组织 化学、 蛋白质免疫印迹或实时荧 光定量PCR。 5.一种标志物CREPT在制备用于确定癌症手术切缘的试剂盒中的应用， 所述试剂盒用 于权利要求1至4中任一项所述的方法， 所述试剂盒包 含： 特异性识别所述CREPT的分子， 和 用以实施所述特异性识别CREPT的分子对CREPT检测的试剂。 6.如权利要求5所述的应用， 其中， 特异性识别CREPT的分子为特异性识别CREPT的抗 体、 与CREPT特异性结合的小分子化 合物。 7.如权利 要求5所述的应用， 其中， 所述用以实施所述特异性识别CREPT的分子对CREPT 检测的试剂包括： 与上述特异性识别 所述CREPT的分子偶联或者直接后间接特异性结合的 可检测或可显色的标记 物。 8.一种用于确定癌症手术切缘的试剂盒， 所述试剂盒包 含： 特异性识别所述CREPT的分子， 用以实施所述特异性识别CREPT的分子对CREPT检测的试剂。 9.如权利 要求8所述的试剂盒， 其 中， 特异性识别CREPT的分子为特异性识别CREPT的抗 体、 与CREPT特异性结合的小分子化 合物。 10.如权利要求8所述的试剂盒， 其中， 所述用以实施所述特异性识别CREPT的分子对 CREPT检测的试剂包括： 与上述特异 性识别所述CREPT的分子偶联或者直接后间接特异 性结 合的可检测或可显色的标记 物。 11.一种对CREPT 进行检测的试剂在制备确定肿瘤手术切缘的试剂盒中的应用， 所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 12.一种对CREPT进行检测的试剂在制备用于鉴别正常组织细胞和发生基因水平癌前 病变的组织细胞的试剂盒中的应用，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115112892 A 2所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 13.一种对CREPT进行检测的试剂在制备用于指示癌化高风险的组织细胞的试剂盒中 的应用， 所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 14.一种对CREPT进行检测的试剂在制备用于指示发生炎症化的组织细胞的试剂盒中 的应用， 所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 15.一种对CREPT 进行检测的试剂在制备用于指示增殖能力变强的试剂盒中的应用， 所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 16.一种对CREPT进行检测的试剂在制备用于指示凋亡发生减少的组织细胞的试剂盒 中的应用， 所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 17.一种对CREPT进行检测的试剂在制备用于判断癌旁组织复发风险高低的试剂盒中 的应用， 所述试剂盒包 含： 用以实施对来自受试者的样品中的CREPT 进行检测的试剂。 18.如权利要求1 1至17中任一项所述的应用， 其中， 对CREPT 进行检测的试剂包括： 对样品中的CREPT 进行PCR和/或qPCR的试剂； 特异性识别CREPT的抗体； 或 与CREPT特异性结合的小分子化 合物。 19.如权利要求18所述的应用， 其中， 特异性识别CREPT的抗体包括： 单克隆抗体或多克隆抗体。 20.如权利 要求18所述的应用， 其 中， 在CREPT进行检测的试剂为特异性识别CREPT的抗 体或与CREPT特异性结合的小分子化合物时， 所述试剂盒还包括用以实施所述特异性识别 CREPT的分子对CREPT检测的试剂， 包括： 与上述特异性识别所述CREPT的分子偶联或者直接 或间接特异性结合的可检测或可显色的标记 物。 21.如权利 要求18所述的应用， 其 中， 在CREPT进行检测的试剂为对样品中的CREPT进行 qPCR的试剂时， 其包括实施qPCR的引物对。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115112892 A 3