(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210634120.1 (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 中华全国供销合作总社昆明食用菌 研究所 地址 650032 云南省昆明市政教路14 号 (72)发明人 刘绍雄　华蓉　刘祈猛　孙达锋　 张俊波　李雪松　李建英　余金凤　 马明　 (74)专利代理 机构 昆明知道 专利事务所(特殊 普通合伙企业) 5 3116 专利代理师 邓菁菁　姜开远 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 用于鉴定白色茶薪菇品种ZJCXG001的EST- SSR分子标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于鉴定白色茶薪菇品 种ZJCXG001的EST ‑SSR分子标记及其应用。 所述 EST‑SSR分子标记组合物由AbA001和AbA0792对 EST‑SSR分子标记组合组成； 本发明首次基于茶 薪菇转录组测序数据， 提供的白色茶薪菇 ZJCXG001菌株的两对ES T‑SSR分子标记在供试的 10个茶薪菇菌株中具有白色茶薪菇ZJCXG001菌 株的专一性。 用本发明提供的引物组合， 可方便 快速地将白色茶薪菇ZJC XG001菌株和亲本白茶6 号 （BC6H） 及其它8个黑褐色品种区分开， 具有节 约成本、 提高效率、 操作方便、 结果准确的优势， 可用于白色茶薪菇ZJC XG001菌株的快速鉴定， 具 有良好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书5页 附图5页 CN 114875166 A 2022.08.09 CN 114875166 A 1.用于鉴定白色茶薪菇品种ZJCXG001的EST ‑SSR分子标记， 其特征在于由AbA001和 AbA0792对EST‑SSR分子标记组合组成； 所述EST‑SSR分子标记的引物序列分别为： AbA001‑F： ACCAACGACAGACA ACACCA； AbA001‑R： CGAACCAGTCGTAC CCTCAT； AbA079‑F： CTGGTACTGCGCAGCA AATA； AbA079‑R： TCGTTGGTGGATCTTCTTCC。 2.根据权利要求1所述用于鉴定白色茶薪菇品种ZJCXG001的EST ‑SSR分子标记， 其特征 在于， 2对 SSR引物的等 位片段数量及分子量大小信息如下：  。 3.根据权利要求1所述金耳EST ‑SSR分子标记在鉴定白色茶薪菇品种ZJCXG001中的应 用。 4.根据权利要求3所述应用， 其特 征在于， 按以下步骤实现： S1、 菌丝培养： 将待检测茶薪菇菌株转接到PDA固体培养基上， 23 ‑25℃培养7 ‑9d后收集 菌丝； S2、 基因组总DNA的提取： 提取所述菌丝的基因组DNA， 紫外分光光度法检测总基因组 DNA浓度和质量； S3、 EST‑SSR分子标记扩增： 采用所述EST ‑SSR分子标记组合物对步骤2提取的DNA进行 EST‑SSR标记的PCR扩增； S4、 比对分析： 将S3得到 的扩增产物进行毛细管电泳检测， 分析EST ‑SSR引物扩增出的 等位片段的数量及分子量大小编号， 毛细管电泳中通过分子量内标GS ‑500LIZ可确定各 EST‑SSR引物扩增的等位位点的相对分子量， 获得不同EST ‑SSR等位片段的编号组合， 符合 EST‑SSR等位片段编号组合的菌种即为白色 茶薪菇ZJCXG0 01菌株。 5.根据权利要求4所述应用， 其特征在于， 鉴定白色茶薪菇ZJCXG001菌株 的EST‑SSR等 位片段编号组合 为3/3。 6.一种用于鉴别白色茶薪菇品种ZJCXG001的试剂盒， 其特征在于， 仅含有针对权利要 求1所述EST ‑SSR分子标记组合的特异性引物组合。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114875166 A 2用于鉴定白色茶薪菇品种ZJCXG0 01的EST‑SSR分子标记及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于食用菌分子生物学技术领域， 具体涉及一种用于鉴定白色茶薪菇品种 ZJCXG001的EST‑SSR分子标记及其应用。 背景技术 [0002]茶薪菇Cyclocybe  chaxingu 隶属于担子菌门， 蘑菇目， 假脐菇科， 环伞属 Cyclocybe 。 别名油茶菇、 茶菇， 商业名统称茶树菇。 茶薪菇盖肥柄脆， 油茶香气浓郁， 味道鲜 美， 其不仅营养丰富， 蛋白质含量高， 含有  8 种人体必需氨基酸； 还 具有清热、 平 肝、 利尿和 健脾等功效。 在民间， 有人用来治疗胃寒、 腰痛、 肾虚尿频、 水肿等疾病， 素有 “中华神菇 ”之 美誉。 据统计， 2020年我国茶薪菇年产量约92.23万吨， 居主要食用菌品种第8位， 是 我国主 栽食用菌之一， 具有重要的经济价值。 目前， 我国茶薪菇干品主要产区为福建和江西； 浙江、 湖北、 云南、 北京等省市是鲜品重要产区。 栽培品种以黑茶3号、 黑茶5号、 古田2 号为主， 多为 黄褐色至黑褐色。 随着茶薪菇产业的不断发展， 以及消费者对品种的需求增加， 茶薪菇白色 品种越来越受消费者的欢迎， 其已经在江西广昌等 地区有少量栽培 。 [0003]目前， 我国茶薪菇白色品种以白茶6号为主， 由于其生产周期长， 茬数多， 产量较 低， 至今尚未实现工厂化栽培， 严重阻碍了其产业的发展； 另一方面， 传统的栽培方式和菌 株老化退化现象对茶薪菇栽培菌株质量的要求越来越高， 需要发展 更为简便、 快速、 精准的 菌株鉴定技术， 以保证每批次使用的都是优质、 准确的菌种。 为了 建立食用菌新品种登记制 度来真正保护我国的品种产权， 必须首先建立成熟 的品种鉴定技术， 为新品种登记奠定基 础。 本研究单位前期做了很多工作， 以白茶6号为亲本， 通过单孢杂交选育出一株适合工厂 化栽培的白色 茶薪菇菌株 “中菌白茶1号 ”（ZJCXG0 01） 。 [0004]近年快速增长的表达序列标签 （EST， Expressed  Sequence Tags） 数据已成为简单 重复序列 （SSR， Si mple Sequence Repeats） 引物设计的重要 来源， 由此而 生的EST‑SSR分子 标记是基于表达序列标签开发微卫星的一种 新型分子标记。 与基因组SSR相比， EST ‑SSR这 种新型分子标记， 凭借依赖于EST ‑SSR侧翼序列的保守性和SSR进化的稳定性， 从而保证了 EST‑SSR引物在不同物种间的高通用性， EST ‑SSR具有在物种之间转移性较高的优点， 不同 物种间EST ‑SSR引物的通用性就可显著提高该标记的利用价值及增加现有标记数目， 而传 统基因组来源的S SR在物种之间的通用性很 差。 [0005]现有关茶薪菇菌种研究的报道都是涉及菌株遗传多样性、 菌种扩繁方法等， 而基 于茶薪菇的EST ‑SSR分子标记开发的研究， 尚未见报道。 因此， 针对上述茶薪菇产业发展现 状， 利用现代分子生物学技术开发精准有效的茶薪菇菌株鉴定体系是一项极为重要的工 作。 发明内容 [0006]本发明的第一目的在于提供一种用于鉴定白色茶薪菇品种ZJCXG001的EST ‑SSR分说　明　书 1/5 页 3 CN 114875166 A 3