(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211136028.9 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 北京农学院 地址 102200 北京市昌平区回龙观镇北农 路7号 申请人 易检生物 （北京） 科技有限公司 (72)发明人 侯晓林　赵振华　刘凤华　王蕾　 周双海　李焕荣　 (74)专利代理 机构 北京中睿智恒知识产权代理 事务所(普通 合伙) 16025 专利代理师 邓大为 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) (54)发明名称 用于鉴别检测猪非洲猪瘟、 猪伪狂犬病毒和 猪细小病毒引物组合物及应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测猪非洲猪瘟病 毒、 猪伪狂犬病毒和猪细小病毒引物组合物及应 用， 包括以下引物： 外引物F3和B3， 内引物FIP和 BIP， 环引物LF和LB。 该引物组合物用于诊断鉴别 非洲猪瘟和猪伪狂犬病毒。 可用于鉴别检测样本 中是否含有非洲猪瘟病毒基因或者伪狂犬病毒 基因。 还能区分伪狂犬病毒疫苗毒和野毒。 本发 明提供的引物组合物检测非洲猪瘟病毒基因和 伪狂犬病毒基因具有灵敏度好、 特异性高等特 点； 可用于非洲猪瘟病毒基因、 伪狂犬病毒和猪 细小病毒基因的检测。 权利要求书2页 说明书13页 附图5页 CN 115287376 A 2022.11.04 CN 115287376 A 1.一种用于检测非洲猪瘟病毒基因、 猪伪狂犬病 毒基因和猪细小病毒基因 的引物组合 物， 其特征在于， 包括用于检测非洲猪瘟病毒的通用型引物与引物组合物， 用于检测伪狂犬 病毒的通用引物与引物组合物， 和用于检测细小病毒的通用引物与引物组合物； 所述用于检测非洲猪瘟病毒B646L基因的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.1所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.2所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.3所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.4所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.5所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.6所示的核苷酸序列； 所述用于检测伪狂犬病毒gB基因的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.7所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.8所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.9所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.10所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.11所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.12所示的核苷酸序列； 所述用于检测伪狂犬病毒基因gD的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.13所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.14所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.15所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.16所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.17所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.18所示的核苷酸序列； 所述用于检测 和鉴别伪狂犬病毒基因gE的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.19所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.20所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.21所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.22所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.23所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.24所示的核苷酸序列； 所述用于检测 和鉴别细小病毒基因VP1的引物组合物， 包括以下引物： F3引物为SEQ  ID No.25所示的核苷酸序列； B3引物为SEQ  ID No.26所示的核苷酸序列； FIP引物为SEQ  ID No.27所示的核苷酸序列； BIP引物为SEQ  ID No.28所示的核苷酸序列； LF引物为SEQ  ID No.29所示的核苷酸序列； LB引物为SEQ  ID No.30所示的核苷酸序列。 2.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒基因、 猪伪狂犬病毒和猪细小病权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115287376 A 2毒基因的引物组合物， 其特征在于， 所述的组合物包括将F3、 B3、 FIP、 BIP、 LF和LB引物序列 经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后具有与所描述核苷酸序列具有相同 功能的DNA分子 。 3.根据权利要求2所述一种用于检测非洲猪瘟病毒基因、 猪伪狂犬病毒和猪细小病毒 基因的引物组合物的应用， 其特征在于， 用环介导等温扩增方法中用以扩增非洲猪瘟基因、 伪狂犬病毒基因和猪细小病毒。 4.根据权利要求3所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒基因、 猪伪狂犬病毒和猪细小病 毒基因的引物组合物的应用， 其特征在于， 所述的引物组合物在环介导等温扩增方法中， 引 物组合物F3、 B3、 FIP、 BIP、 LF和LB的摩尔浓度比为1： 1： 4 ‑16： 4‑16： 2‑8： 2‑8。 5.根据权利要求3所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒基因、 猪伪狂犬病毒和猪细小病 毒基因的引物组合物的应用， 其特征在于， 所述的环介导等 温扩增反应条件为60 ‑65℃恒温 60min。 6.根据权利要求1所述的一种用于检测非洲猪瘟病毒基因、 猪伪狂犬病毒和猪细小病 毒基因的引物组合物的应用， 其特征在于， 在制备检测非洲猪瘟病毒基因、 伪狂犬病毒和猪 细小病毒基因试剂盒和基因芯片中的应用。 7.一种用于非洲猪瘟病 毒、 猪伪狂犬病 毒和猪细小病 毒检测的试剂 盒， 其特征在于， 包 含权利要求1所述的引物组合物。 8.根据权利要求7所述的一种用于非洲猪瘟病毒、 猪伪狂犬病毒和猪细小病毒检测的 试剂盒， 其特 征在于， 所述的试剂盒和芯片的检测步骤 包括： 1)提取待测病毒或其 他类型待检样品中基因 组DNA。 2)以步骤(1)提取的基因为模版， 采用上述引物组合物进行对非洲猪瘟病毒基因、 猪伪 狂犬病毒或猪细小病毒基因的环介导 等温扩增。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115287376 A 3