(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210632707.9 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 山西农业大 学 地址 030031 山西省太原市小店区龙城大 街81号 (72)发明人 贾举庆　张美俊　任长忠　黄胜雄　 杨武德　王娜　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 齐宝玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于燕麦成熟期基因表达分析的内参基因 及应用 (57)摘要 本发明公开了用于燕麦成熟期基因表达分 析的内参基因及应用。 属于分子生物学技术领 域。 本发明提供了一组成熟期燕麦内参基因， 所 述内参基因为AsFPGS ‑1D1RF和AsFPGS ‑1D2RF。 本 发明解决了现有燕麦荧光定量PCR实验中没有可 靠内参基因的现状； 筛选出的内参基因适用于分 析功能基因在燕麦成熟期的表达水平， 能够提高 检测结果的可靠性、 稳定性和重复性。 权利要求书1页 说明书9页 序列表6页 附图3页 CN 115058532 A 2022.09.16 CN 115058532 A 1.用于燕麦成熟期基因表达分析的内参基因， 其特征在于， 所述内参基因为AsFPGS ‑ 1D1RF和AsFPGS ‑1D2RF； 其中， AsFPGS‑1D1RF的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示； TTAACCGTACTGATCCCTTACCAGACGAGTTCATTAAAGGGCTCTCAAGTGCTTCTTTGCAAGGCCGAGCAC AAATTGTTCCAGATTCACAAGTAAATTCTGAAGAGAAGGACCGAGATTGTTCTTTA； SEQ ID NO:1； AsFPGS‑1D2RF的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； AGGACCGAGATTGTTCTTTAGTGTTCTATTTGGATGGCGCGCACAGCCCTGAAAGTATGGAAATATGTGCTA CATGGTTTTCTCGTGTTACCAA GGAGGATA GAGTACCATCTTCCATGGA GCAGTCTAGGACA GGCGGCAAATCTCG AAAGATTCT； SEQ ID NO:2。 2.根据权利要求1所述的用于燕麦成熟期基因表达分析的内参基因， 其特征在于， AsFPGS‑1D1RF的实时荧 光定量PCR引物序列见SEQ  ID NO:3和SEQ  ID NO:4； TTAACCGTACTGATC CCTTA； SEQ ID NO:3； TAAAGAACAATCTCGGTCCT； SEQ ID NO:4； AsFPGS‑1D2RF的实时荧 光定量PCR引物序列见SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:6； AGGACCGAGATTGTTCTTTA； SEQ ID NO:5； AGAATCTTTCGAGATTTGCC； SEQ ID NO:6。 3.权利要求1所述的内参基因在燕麦基因表达分析中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058532 A 2用于燕麦成熟期基因表达分析的内参 基因及应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技术领域， 更具体的说是涉及用于燕麦成熟期基 因表达分 析的内参基因及应用。 背景技术 [0002]尽管近几年来燕麦基因组数据已有所发表， 但总的来说， 我们对燕麦植物的基因 信息知之甚少， 这不利于燕麦优良基因的发掘， 也制约了该物种生物学过程的分子机制的 研究。 [0003]研究燕麦基因功能需要对基因表达进行分析， 而研究相关基因的表达需要良好的 内参基因进 行数据校正和归一化。 现如今， 随着分子生物学的发展， 植物中内参基因的研究 越来越多， 而有关燕麦单拷贝内参基因的研究鲜有报道， 导致燕麦基因表达研究无单拷贝 内源参考基因作为 参考定量。 [0004]目前国内外对于燕麦内参基因的研究还很少， 这对燕麦功能基因的挖掘造成很大 的阻碍。 究其原因可能由于燕麦基因组数据近几年来才逐渐完善， 之前我们只能依据一组 种子中的转录组数据， 并且前人研究认为， 内参基因的选择应尽量为拷贝 数少的基因， 原因 是多拷贝内参基因各拷贝常表现为组织特异 性， 在植物的同一组织或不同组织中表达量会 出现差异， 导致整体多拷贝内参基因的准确 性极具风险， 但这对于多倍体植物燕麦来说选 择合适的单拷贝内参基因十分不 易。 [0005]综上， 如何提供一种燕麦单拷贝内参基因是本领域 技术人员亟需解决的问题。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明提供了用于燕麦成熟期基因表达分析的内参基因及应用。 [0007]理想的内参基因是在不同胁迫条件、 不同组织、 不同时期均能恒定表达。 但研究证 明， 传统内参基因存在一些弊端， 这些内参基因不能在各种状态下表达量始终保持稳定， 换 句话说， 没有通用的内参基因适合于所有研究对象。 目前， 很多研究都对以上观点做了证 实， 比如赵小龙等分析了RPL4、 RPB2、 18SRNA、 GAPDH、 EF1α 等10个内参基因， 在茯苓不同生长 时期中， 28SRNA基因表达最稳定； 在茯苓的不同组织中， 28SRNA和α ‑TUB作为组合结果更为 精准； 在不同逆境环 境中， GAPDH和ACT作为内参组合更好； 在所有的样品中， α ‑TUB基因最为 稳定。 唐枝娟等人分析了18SRNA、 GAPDH、 EF1α 等6个在水稻中常用的内参基因， 在白叶枯病 菌侵染下的水稻叶片中， EF1α、 ACT、 TUB三个内参基因表达量最稳定。 陈贤等人分析了 25SRNA、 UBC、 UBQ ‑5、 等10个常见的内参基因， 在水稻叶片用褪黑素处理的不同天数中， e1F ‑ 4a和UBQ‑5组合最适合作为内参。 安红强等人筛选了26个表达稳定的基因以及5个传统内参 基因， 在铁 皮石斛原球茎的发育时期中， ASS和APH1L两个基因作为内参组合最好； 在所有实 验样品中， 传统内参基因稳定性 比新型内参基因稳定性差。 付媛媛等人分析了β ‑actin、 Actin2、 MSC27等8个内参基因， 在紫花苜蓿不同组织和不同胁迫处理下， MSC27、 Actin2、 18SRNA、 EF1α 四个内参基因是表达量 最稳定的基因。 类似情况也存在于蚕豆和萱草中。说　明　书 1/9 页 3 CN 115058532 A 3