(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210657060.5 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 锡林郭勒职业学院 地址 026000 内蒙古自治区锡林郭勒盟锡 林浩特市明安图街1 1号 申请人 锡林郭勒盟坤源生物科技有限公司 (72)发明人 郭梁　徐伟良　李春冬　李凤忠　 刘国强　罗建兴　乌仁图雅 　 木其勒　特格希巴雅尔 　 (74)专利代理 机构 成都方圆聿联专利代理事务 所(普通合伙) 51241 专利代理师 李鹏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针 组合及检测方法 (57)摘要 本发明中公开了用于检测香杏丽蘑和双孢 蘑菇的引物探针组合， 包括正反向引物、 香杏丽 蘑探针、 双孢蘑菇探针和质控探针； 所述正反向 引物的序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示； 所述 香杏丽蘑 探针、 双孢蘑菇探针和质控探针的序列 依次如SEQIDNo.3 ‑SEQIDNo.5所示。 本发明同时 公开了利用该引物探针组合对香杏丽蘑和双孢 蘑菇进行检测的方法。 本发明中的引物探针组合 的特异性强、 灵敏度高， 实现香杏丽蘑和双孢蘑 菇的定性、 定量检测， 显著提高对香杏丽蘑和双 孢蘑菇的检测准确度； 还可 以对香杏丽蘑、 双孢 蘑菇及质控进行同管的检测， 有效节省检测工序 和时间， 显著降低检测成本 。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图3页 CN 114854899 A 2022.08.05 CN 114854899 A 1.用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合， 其特征在于， 包括正反 向引物、 香杏 丽蘑探针、 双孢蘑菇探针和质控探针； 所述正反向引物的序列如SEQ  ID No.1和SEQ  ID  No.2所示； 所述香杏丽蘑探针、 双孢蘑菇探针和质控探针的序列依次如SEQ  ID No.3‑SEQ  ID No.5所示。 2.根据权利要求1所述的引物探针组合， 其特征在于， 所述香杏丽蘑探针、 双孢蘑菇探 针和质控探针的5'端修饰有报告基团， 3'端修饰有淬灭基团。 3.根据权利要求2所述的引物探针组合， 其特征在于， 所述报告基团为FAM、 HEX、 ROX或 CY5中的一种； 所述淬灭基团为TAMRA、 MGB、 BHQ1或BHQ2中的一种。 4.一种检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的方法， 其特征在于， 以待测蘑菇样品DNA为模板， 使 用如权利要求1 ‑3任一项所述的引物探针组合， 进行Real ‑time PCR扩增， 根据扩增曲线对 待测蘑菇样品中香 杏丽蘑和双孢蘑菇的DNA含量进行定性定量检测。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述Real ‑time PCR扩增的参数为： 预变性 温度94℃， 3 0s， 变性温度94℃， 5s， 退火延伸温度6 0℃， 31s， 40个 循环。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述Real ‑time PCR扩增的反应体系为： Probe qPCR预混液10 μL、 待测蘑菇样品DNA模板2 μL， 灭菌的去离子水4.5 μL； 正反向引物各1 μL， 浓度均为10μmol/L； 香杏丽蘑探针、 双孢蘑菇探针和质控探针各0.5μL， 浓度均为10μ mol/L； 体系 总体积20 μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854899 A 2用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及食品检测技术领域， 尤其涉及用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探 针组合及检测方法。 背景技术 [0002]双孢蘑菇 又名白蘑菇、 蘑菇、 口蘑、 洋蘑菇等。 双孢蘑菇子实体中等大， 菌盖宽5 ‑12 厘米， 初半球形， 后平展， 白色， 光滑， 略干渐变黄色， 边缘初期内卷。 菌肉白色， 厚， 伤后略变 淡红色， 具蘑菇特有的气味。 菌褶初粉红色， 后变褐色至黑褐色， 密， 窄， 离生， 不等长， 菌柄 长4.5‑9厘米， 粗1.5 ‑3.5厘米， 白色， 光滑， 具丝光， 近圆柱形， 内部松软或中实， 菌环单层， 白色， 膜质， 生菌柄中部， 易脱落。 双孢蘑菇味道鲜美， 是一种栽培规模大、 栽培范围广的食 用菌。 其蛋白质含量高达42％(干重)， 氨基酸的种类丰富， 核苷酸和维生素也很丰富。 双孢 蘑菇也可药用。 其中含多量酪氨酸酶， 对降低血压有效果。 还可以制成肺炎辅助治疗剂。 有 的国家还发现含有抗癌物质和抗细菌的广谱抗菌素。 由于深层培养的研究成功， 人们还可 利用蘑菇菌 丝体生产蛋白质、 草 酸和菌糖等物质。 [0003]香杏丽蘑又称虎皮香杏、 黄皮口蘑、 香杏蘑。 子实体一般中等大。 菌盖半球形至平 展， 光滑， 不粘， 带白色或淡土黄色至淡土红色， 边缘内卷。 菌肉白色， 肥厚。 菌褶白色， 或稍 带黄色， 稠密， 窄， 弯生， 不等长。 菌柄 白色， 或稍带黄色， 具条纹， 内实。 夏秋季在草原上群 生、 丛生或形成蘑菇圈。 此种蘑菇菌肉肥厚、 具香味、 味道鲜美， 其商品名有香杏、 香杏片等。 香杏丽蘑的营养价值十分丰富， 含有较多的蛋白质， 碳水化合物， 维生素等， 还有微量元素 和矿物质， 多吃可增人体免疫力。 香 杏丽蘑中含有丰富的单糖、 双糖和多糖。 [0004]但是由于人为因素和气候因素的影响， 使得香杏丽蘑种群数量减少， 香杏丽蘑的 质量和产量每况愈下， 难以满足商品化、 市场化的要求， 导致香杏丽蘑价格上涨。 由于其价 格的昂贵和特有珍稀价值高， 市场上常出现冒充伪 劣产品和其他种类野生菌混淆 的现象。 而商家经常以一些来源广泛、 容 易获取的蘑菇充当香 杏丽蘑进行销售。 [0005]我国对于食用菌真伪鉴别技术方面的研究起步晚， 这一领域的研究还处于初 步阶 段。 因此需要更为 准确的检测手段来对香 杏丽蘑和双孢蘑菇进行检测。 发明内容 [0006]本发明的目的在于解决现有技术中存在的难以对香杏丽蘑和双孢蘑菇的真实性 进行鉴别的问题， 提供用于检测香杏丽蘑和双孢蘑菇的引物探针组合及检测方法， 可以同 管检测香 杏丽蘑和双孢蘑菇， 对两者进行准确的定性和定量检测。 [0007]为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案如下： 用于检测香杏丽蘑和双孢蘑 菇的引物探针组合， 包括正反向引物、 香杏丽蘑探针、 双孢蘑菇探针和质控探针； 所述正反 向引物的序列如SEQ  ID No.1和SEQ  ID No.2所示； 所述香杏丽蘑探针、 双孢蘑菇探针和质 控探针的序列依次如SEQ  ID No.3‑SEQ ID No.5所示。 [0008]优选地， 所述香杏丽蘑探针、 双孢蘑菇探针和质控探针的5'端修饰有报告基团， 3'说　明　书 1/5 页 3 CN 114854899 A 3