(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210742116.7 (22)申请日 2022.06.28 (71)申请人 深圳市爱医生物科技有限公司 地址 518038 广东省深圳市宝安区西乡街 道铁岗社区桃花源智创小镇B2栋4层 申请人 深圳市易瑞生物技 术股份有限公司 (72)发明人 莫秋华　王炳志　严义勇　杨波　 付辉　周巧妮　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 肖云 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6893(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01)C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/42(2006.01) C12R 1/19(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/445(2006.01) C12R 1/46(2006.01) C12R 1/32(2006.01) C12R 1/90(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于检测多种动物源性食品病原体的引物 探针组、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测多种动物源性食品 病原体的引物探针组、 试剂盒及其应用， 涉及病 原体检测技术领域。 该引物探针组包括针对沙门 氏菌、 大肠杆菌0157:H7、 志贺氏菌、 金黄色葡萄 球菌、 单增李斯特菌、 2型猪链球菌、 布鲁氏菌、 结 核分支杆菌、 旋毛虫、 弓形虫、 囊虫、 棘球绦虫、 广 州管圆线虫、 华支睾吸虫和戊型肝炎病毒多种动 物源性食品病原 体的特异性引物对和探针。 上述 引物探针组能够快速、 高效、 特异地检测出动物 源性食品中的病原体， 对于 保障食品安全和人体 健康具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书14页 序列表8页 附图8页 CN 114959082 A 2022.08.30 CN 114959082 A 1.用于检测多种动物源性食品病原体的引物探针组， 其特征在于， 包括如下特异性引 物对： 针对沙门氏菌的特异性引物对， 正向引物ST ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 反向 引物ST‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； 针对大肠 杆菌0157:H7的特异性引物对， 正向引物EC ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所 示， 反向引物E C‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:5所示； 针对志贺氏菌的特异性引物对， 正向引物SH ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:7所示， 反向 引物SH‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示； 针对金黄色葡萄球菌的特异性引物对， 正向引物SA ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:10所 示， 反向引物SA ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:11所示； 针对单增李斯特菌的特异性引物对， 正向引物LM ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:13所 示， 反向引物LM ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:14所示； 针对2型猪链球菌的特异性引物对， 正向引物SS2 ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:16所 示， 反向引物S S2‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:17所示； 针对布鲁氏菌的特异性引物对， 正向引物BM ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:19所示， 反 向引物BM ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:20所示； 针对结核分支杆菌的特异性引物对， 正向引物MT ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:22所 示， 反向引物MT ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:23所示； 针对旋毛虫的特异性引物对， 正向引物TS ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:25所示， 反向 引物TS‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:26所示； 针对弓形虫的特异性引物对， 正向引物TG ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:28所示， 反向 引物TG‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:29所示； 针对囊虫的特异性引物对， 正向引物BW ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:31所示， 反向引 物BW‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:32所示； 针对棘球绦虫的特异性引物对， 正向引物TE ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:34所示， 反 向引物TE ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:35所示； 针对广州管圆线虫的特异性引物对， 正向引物TE ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:37所 示， 反向引物TE ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:38所示； 针对华支睾吸虫的特异性引物对， 正向引物CS ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:40所示， 反向引物CS ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:41所示； 针对戊型肝炎病毒的特异性引物对， 正向引物HEV ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:43所 示， 反向引物H EV‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:44所示。 2.根据权利要求1所述的引物探针组， 其特 征在于， 包括如下探针： 针对沙门氏菌的探针ST ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示； 针对大肠杆菌 0157:H7的探针E C‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示； 针对志贺氏菌的探针SH ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:9所示； 针对金黄色葡萄球菌的探针SA ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示； 针对单增李斯特菌的探针LM ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:15所示； 针对2型猪链球菌的探针S S2‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:18所示；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114959082 A 2针对布鲁氏菌的探针BM ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:21所示； 针对结核分支杆菌的探针MT ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:24所示； 针对旋毛虫的探针TS ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:27所示； 针对弓形 虫的探针TG ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:30所示； 针对囊虫的探针BW ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:33所示； 针对棘球绦虫的探针TE ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:36所示； 针对广州管圆线虫的探针AC ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:39所示； 针对华支睾吸虫的探针CS ‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:42所示； 针对戊型肝炎病毒的探针H EV‑P的核苷酸序列如SEQ  ID NO:45所示。 3.根据权利要求2所述的引物探针组， 其特征在于， 所述探针的两端分别标记有荧光报 告基因和荧光淬灭基因； 优选地， 所述探针5 ’端标记有荧光报告基因， 3 ’端标记有荧光淬灭 基因。 4.根据权利要求3所述的引物探针组， 其特征在于， 所述荧光报告基因选自FAM和ROX； 所述荧光淬灭基因选自BHQ1和MGB。 5.一种检测动物源性食 品病原体的试剂 盒， 其特征在于， 试剂 盒用于检测沙门氏菌、 大 肠杆菌0157:H7、 志贺氏菌、 金黄色葡萄球菌、 单增李斯特菌、 2型猪链球菌、 布鲁氏菌、 结核 分支杆菌、 旋毛虫、 弓形虫、 囊虫、 棘球绦虫、 广州管圆线虫、 华支睾吸虫和戊型肝炎病毒中 的至少一种； 所述试剂盒包括扩增反应试剂， 所述扩增反应试剂包括权利要求2至4任一项所述的引 物探针组。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括内参引物探针组、 阳 性对照品和阴性对照品中的至少一种。 7.权利要求1至4任一项所述的引物探针组在制备检测动物源性食品病原体的产品中 的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述产品的使用方法包括以下步骤： 采用 所述产品对样品基因 组进行荧 光PCR检测， 分析检测数据， 得到分析 结果。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述荧光PCR检测为双重荧光定量PCR检 测； 优选地， 所述双重荧 光定量PCR检测的设计组合如下： 沙门氏菌和大肠杆菌 0157:H7； 志贺氏菌和金黄色葡萄球菌； 单增李斯特菌和2型猪链球菌； 布鲁氏菌和结核分支杆菌； 旋毛虫和弓形 虫； 囊虫和棘球绦虫； 广州管圆线虫和华支睾吸虫； 戊型肝炎病毒。 10.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述荧光PCR检测的反应程序为： 48℃～ 52℃5min～10min； 93℃～9 5℃3min； 9 3℃～95℃13sec～17sec、 58℃～ 61℃55sec～ 65sec， 35～45个循环。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114959082 A 3