(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210754409.7 (22)申请日 2022.06.28 (71)申请人 杭州博拓生物科技股份有限公司 地址 311121 浙江省杭州市余杭区中泰街 道富泰路17号 (72)发明人 叶春生　吴淑江　董大陆　吴丹娜　 (74)专利代理 机构 杭州中成专利事务所有限公 司 33212 专利代理师 朱莹莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于检测呼吸道腺病毒 7型的特异性引物和 探针及其应用 (57)摘要 本发明公开一种快速检测呼吸道腺病毒7型 的特异性引物和探针及其应用， 同时提供包括特 异性引物和探针的荧光定量聚合酶链式反应 (Polymerase  Chain Reaction,PCR)检测试剂盒 (探针法)。 本发明提供的试剂盒， 使用呼吸道腺 病毒病毒7型Hexon基因特异性引物和探针通过 荧光定量PCR快速检测呼吸道腺病毒7型， 反应在 一管内完成， 操作方便， 并降低了污染风险， 实现 呼吸道腺病毒7型的快速检测。 本发明具有操作 简单、 检测时间短、 特异性强、 准确率高等优点。 本发明为临床样本中呼吸道腺病毒病毒7型感染 的辅助诊断提供了有效的工具， 并可推广应用于 临床和实验研究。 权利要求书2页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 115287373 A 2022.11.04 CN 115287373 A 1.检测呼吸道腺病毒7 型的特异性引物和探针， 其特 征在于， 所述特异性引物为ADV ‑F和ADV‑R， 如SEQ ID NO： 1‑2所示： ADV‑F的序列信息： 5 ’ ‑CGCCAGGTGGTCTCTTGAC‑3’， ADV‑R的序列信息： 5 ’ ‑CGTAGGTGTAGGAGCCAGGTA‑3’； 探针为ADV ‑P， 如SEQ ID NO： 3所示： ADV‑P的序列信息： 5 ’ ‑CCATTCAACCACCACCGC‑3’。 2.如权利 要求1所述的检测呼吸道腺病毒7型的特异性引物和探针， 其特征在于， ADV ‑P 的5’端进行报告荧 光染料FAM标记， 3 ’端进行荧光淬灭基团MGB标记。 3.检测呼吸道腺病毒7型的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要 求1或2所述的特异性引物和探针。 4.如权利要求3所述的检测呼吸道腺病 毒7型的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于， 所述 的特异性引物和探针浓度均为10微摩尔。 5.如权利要求3所述的检测呼吸道腺病 毒7型的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于， 还包 括荧光定量PCR反应缓冲液、 荧 光定量PCR反应混合酶和无核酸酶水。 6.如权利要求5所述的检测呼吸道腺病 毒7型的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于， 试剂 盒包括： 总反应体系为25微升， 其中模板可以为阳性对照、 阴性对照或待检样本 。 7.如权利要求6所述的检测呼吸道腺病 毒7型的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于， 试剂 盒的荧光定PCR反应扩增条件： 第一阶段， 预变性： 95摄氏度， 2分钟； 第二阶段， PCR扩增： 95 摄氏度， 5秒； 60摄氏度， 30秒， 45个循环， 每次循环第二阶段60摄氏度扩增后采集荧光信号， 选择荧光通道FAM。 8.权利要求3 ‑7所述的检测呼吸道腺病毒7型的荧光定量PCR试剂盒的使用方法， 包括 如下步骤： 1)利用核酸 提取试剂从待测样本中提取DNA； 2)利用检测试剂盒中提供的引物与探针、 荧光定量PCR反应缓冲液、 荧光定量PCR反应 混合酶和无核酸酶水进行荧 光定量PCR反应， 扩增核酸； 3)荧光定量PCR反应扩增条件： 第一阶段， 预变性： 95摄氏度， 2分钟； 第二阶段， PCR扩 增： 95摄氏度， 5秒； 60摄氏度， 30秒， 45个循环， 每次循环第二阶段60摄氏度扩增后采集荧光 信号， 选择荧 光通道FAM； 4)根据Ct值判断荧 光定量PCR检测结果， 判定样品中是否含有呼吸道腺病毒7 型。 9.权利要求3 ‑7所述的检测呼吸道腺病毒7型的荧光定量PCR试剂盒用于快速鉴定呼吸权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115287373 A 2道腺病毒7 型的应用。 10.如权利要求9所述的应用， 所述试剂盒用于体液、 尿囊液或其 他环境样本中的检测。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115287373 A 3