(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210620701.X (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 宁夏农林科 学院枸杞科 学研究所 地址 750002 宁夏回族自治区银川市金凤 区黄河东路590号 (72)发明人 樊云芳　陈晓军　曹有龙　秦垦　 安巍　张英　彭海　李甜甜　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 魏志恒 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于枸杞品种鉴定的MNP标记位点、 引物组 合物和试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于枸杞品种鉴定的MNP 标记位点、 引物组合物和试剂盒及其应用， 所述 MNP标记位点为在枸杞基因组上筛选的在枸杞种 群内具有多个核苷酸多态性的基因组区域， 包括 枸杞基因组GCA_019175385.1上MNP ‑1～MNP‑500 的 标记位点。 所述 引物如SEQIDNO .1～ SEQIDNO.1000所示。 所述MNP标记位点数量多、 分 型准确性高、 品种区分力强， 满足枸杞品种真实 性鉴定和实质性派生品种鉴定的需求； 所述引物 互不干扰， 鉴定流程高效、 鉴定结果重现性强， 满 足DNA指纹数据库构建的要求； 可应用于枸杞品 种鉴定， 在中药产品的新品种培育、 知识产权保 护、 产品质量控制等方面具有极大的应用价 值。 权利要求书1页 说明书31页 序列表154页 附图1页 CN 114990254 A 2022.09.02 CN 114990254 A 1.一种用于枸杞品种鉴定的MNP标记位点， 其特征在于， 所述MNP标记位点为在枸杞基 因组上筛选的在枸杞种群内具有多个核苷酸多态性的基因组区域， 所述MNP标记位点包括 枸杞基因 组GCA_019175 385.1上MNP ‑1～MNP‑500的标记位 点。 2.一种用于检测权利要求1所述MNP标记位点的多重PCR引物 组合物， 其特征在于， 所述 多重PCR引物组合物包括500对引物， 所述500对引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID  NO.1000所示。 3.一种用于检测权利要求1所述MNP标记位点的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括 权利要求2所述的引物组合物。 4.权利要求1所述MNP标记位点或权利要求2所述引物组合物或权利要求3所述试剂盒 在枸杞品种真实性 鉴定中的应用。 5.权利要求1所述MNP标记位点或权利要求2所述引物组合物或权利要求3所述试剂盒 在枸杞实质性派生品种鉴定中的应用。 6.权利要求1所述MNP标记位点或权利要求2所述引物组合物或权利要求3所述试剂盒 在构建枸杞品种DNA指纹数据库中的应用。 7.权利要求1所述MNP标记位点或权利要求2所述引物组合物或权利要求3所述试剂盒 在枸杞种质资源遗传多样性分析中的应用。 8.权利要求1所述MNP标记位点或权利要求2所述引物组合物或权利要求3所述试剂盒 在枸杞分子 育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990254 A 2用于枸杞品种鉴定的MNP标记位点、 引物组合物和试剂盒及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技术领域， 更具体的说是涉及一种用于枸杞品种鉴定的 MNP标记位 点、 引物组合物和试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]枸杞(Lyciumbararum  L.)是茄科栒杞属的一种多年生落叶分枝小灌木， 其果实枸 杞子自古被誉为 “生命之树 ”， 营养成分丰富， 具有极大的药用价值， 被广泛应用在医疗、 饮 食、 保健等许多方面。 枸杞 品种众多， 其中宁夏枸杞子载入了 《中国药典》 2015版， 市场需求 日益增大， 经济价值较高， 因此市场中以次充好的现象屡见不鲜， 损害消费者的权益， 也不 利于枸杞产业的可持续发展。 [0003]枸杞品种鉴定经历了形态鉴定、 细胞学鉴定、 生化鉴定到DNA分子鉴定的发展历 程， 利用分子标记技术对品种间DNA水平上的多态性信息进 行统计分析， 可较为全面地掌握 种质资源的遗传多样性和遗传变异水平， 因此广泛运用于植物品种鉴定中。 目前广泛应用 的分子标记类型有SSR(Simple  Sequence  Repeats)标记和SNP(Single  Nucleotide   Polymorphism)标记。 SSR标记包含一段简单重复序列， 其突出优势是多态性高， 但SSR标记 法一次PCR扩增一般不超过5个SSR位点， 通量低， DNA聚合酶在扩增SSR位点时， 存在滑动现 象， 容易产生不真实的滑脱基因型， 滑脱基因型与样本中主基因型区分不开， 导致SSR标记 法难以用于多倍体植物的鉴定。 全基因组重测序技术一次可检测大量的SSR位点， 但基因组 上仅～3％的序列为SSR位点， 导致检测成本较高。 因此， 实际应用中往往只能检测有限的 SSR位点， 无法满足实质性派生品种鉴定对标记数量的要求。 基因芯片法一次可检测成千上 万、 甚至几十万个SNP位点， 通量大大高于SSR标记。 然而， 一个SNP标记位点仅有2种等位基 因型， 多态性远低于SSR标记， 难以区分多倍体植株； 检测SNP标记的探针固定在芯片上， 芯 片一旦合成， 很难调整与改变， 灵活性差 。 [0004]目前枸杞缺乏品种真实性鉴定的标准， 虽然少数研究论文发表了利用SSR标记在 枸杞遗传育种和 遗传分析中的应用， 但是标记位点数较少， 如已发表的论文 “利用SSR标记 构建枸杞品种分子身份证 ”中仅研究了2 4个SSR位点对16个枸杞品种的区分效果， 虽然能达 到品种区分的效果， 但由于标记数量少无法鉴定实质性派生品种。 [0005]因此， 开发用于枸杞品种鉴定 的高多态性的新型分子标记及其检测技术， 成为亟 待解决的技 术问题。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明提供一种用于枸杞品种鉴定的MNP标记位点、 引物组合物和试剂 盒及其应用， 不仅可以对枸杞品种进行品种真实性鉴定和实质性派生品种鉴定， 也可以对 枸杞品种进行遗传分析， 具有区分度强、 通 量高、 准确度高的效果。 [0007]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案：说　明　书 1/31 页 3 CN 114990254 A 3