(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211087528.8 (22)申请日 2022.09.07 (71)申请人 中国科学院大学宁波华美医院 地址 315010 浙江省宁波市西北街 41号 (72)发明人 付丽云　胡耀仁　沈丽丽　蒋镇洛　 胡梦圆　 (74)专利代理 机构 杭州品众专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33459 专利代理师 苗小伟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/113(2010.01) (54)发明名称 环状RNA用于筛查原发性肝细胞肝癌及其试 剂盒 (57)摘要 本发明公开一种环状RNA在制备筛查原发性 肝细胞肝癌、 或预测原发性肝细胞肝癌预后产品 中的应用， 所述环状RNA为hsa_circ_0006037， 其 编码核酸序列如SEQ  ID No.1所示。 本发明公开 一种引物对， 为hsa_cir c_0006037的特异性引物 对， 具体如SEQ  ID No.2和SEQ  ID No.3所示。 本 发明公开一种试剂盒用于定量检测血浆外泌体 中hsa_cir c_0006037的表 达。 本发明公开上述试 剂盒的使用方法。 hsa_cir c_000603 7作为原发性 肝细胞肝癌相关环状RNA， 不仅能成为原发性肝 细胞肝癌诊断标志物， 而且有望成为原发性肝细 胞肝癌的治 疗靶点， 具有十分重要的科 学意义。 权利要求书1页 说明书6页 附图5页 CN 115232879 A 2022.10.25 CN 115232879 A 1.一种环状RNA在制备筛查原发性肝细胞肝癌、 或预测原发性肝细胞肝癌预后的产品 中的应用， 其特征在于， 所述环状RNA为hsa_circ_000603 7， 其编码核酸序列如SEQ  ID No.1 所示。 2.根据权利要求1所述应用， 其特征在于， 通过检测环状RNA的表达水平以判断是否存 在原发性肝细胞肝癌的癌细胞， 或， 通过检测环状RNA的表达水平以预测原发性肝细胞肝癌 患者预后状况。 3.根据权利要求1所述应用， 其特 征在于， 所述产品为药物、 试剂或试剂盒。 4.一种引物对， 其特征在于， 其为权利要求1所述应用中所用hsa_circ_0006037的特异 性引物对， 具体如SEQ  ID No.2和SEQ ID No.3所示。 5.一种试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒用于定量检测血浆外泌体中hsa_circ_ 0006037的表达 。 6.根据权利要求5所述试剂盒， 其特 征在于， 包括： 如权利要求 4所述引物对。 7.根据权利要求5所述试剂盒， 其特 征在于， 还 包括： 标准DNA模板和PCR反应液。 8.根据权利要求5所述试剂盒， 其特 征在于， PCR反应液为 荧光定量PCR反应液。 9.一种如权利要求5 ‑8任一项所述试剂盒的使用方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 1)从样本中分离血浆外泌体； 2)提取样品总RNA； 3)将样品总RNA逆转录成cDNA； 4)定量扩增hsa_circ_0 006037， 并根据相对定量结果进行判断。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232879 A 2环状RNA用于筛查原发性肝细胞肝癌及其试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物技术领域， 尤其涉及一种环状RNA在制备筛查原发性肝细胞 肝癌、 或预测原发性肝细胞肝癌预后的产品中的应用， 一种引物对， 以及一种试剂盒及其使 用方法。 背景技术 [0002]原发性肝细胞肝癌(hepat ocellular  carcinoma,HCC， 以下简称肝癌)是世界上第 5大常见肿瘤， 是癌症相关的第3位死因。 目前我国肝癌发病人数约占全球的55％， 在肿瘤相 关死因中位居第2。 [0003]肝癌的发生发展是多因素、 多步骤的复杂过程， 早期症状不典型， 临床缺乏有效的 预防、 检测及治疗手段。 甲胎蛋白( α fetoprotein,AFP)是肝癌筛查最常用的血清学肿瘤标 记物。 然而， 即使采用最有效的截断值(10～20 μg/L)， AFP诊断的敏感性只有60％左右。 同时 AFP高于正常上限(20 μg/L)也可在20％的慢性肝炎及20～60％的肝硬化患者中观察到。 因 此， 挖掘新型肝癌肿瘤标记物用于早期有效的检测肿瘤的发生、 发展及预后检测显得尤为 重要。 [0004]外泌体由活细胞主动释放出来， 包含核酸、 蛋白质和脂质等组分， 能够参与细胞 间 信息交流， 可反映疾病的动态变化， 且 可在外周血中分离出来， 为癌症诊断提供了丰富的肿 瘤生物标志 物。 [0005]而环状RNA(circular  RNA,circRNA)具有不容易被核酸外切酶降解、 半衰期 长、 表 达水平差异大和存在序列保守性等特点， 同时， 研究发现circRNA可包裹至外泌体中， 在癌 症的诊断中发挥了 重要的作用。 发明内容 [0006]本发明提出一种环状RNA在制备筛查原发性肝细胞肝癌、 或预测原发性肝细胞肝 癌预后的产品中的应用， 一种引物对， 以及一种试剂盒及其使用方法。 [0007]本发明目的之一在于： 提供一种环状RNA在制备筛查原发性肝细胞肝癌、 或预测原 发性肝细胞肝癌预后的产品中的应用， 所述环状RNA为hsa_circ_0006037， 其编码核酸序列 如SEQ ID No.1所示。 [0008]hsa_circ_0006037由亲尾蛋 白(aftiphilin， AFTPH)基因3、 4、 5和7号外显子反向 剪切形成， 全长 392nt。 [0009]优选地， 通过检测环状RNA的表达水平以判断是否存在原发性肝细胞肝癌的癌细 胞， 或， 通过检测环状RNA的表达水平以预测原发性 肝细胞肝癌 患者预后状况。 [0010]优选地， 所述产品为药物、 试剂或试剂盒。 [0011]本发明目的之二在于： 提供一种引物对， 其为hsa_circ_0006037的特异性引物对， 具体如SEQ  ID No.2和SEQ ID No.3所示。 [0012]本发明目的之三在于： 提供一种试剂盒， 所述试剂盒用于定量检测血浆外泌体中说　明　书 1/6 页 3 CN 115232879 A 3