(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210778180.0 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 湖北省农业科 学院畜牧兽医研究所 地址 430064 湖北省武汉市洪山区南湖瑶 苑特4号畜牧所 (72)发明人 吴俊静　刘晓哲　梅书棋　彭先文　 乔木　周佳伟　徐忠　张宇　 李梓芃　孙华　宋忠旭　赵海忠　 李良华　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 万青青 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 猪肌内脂肪含量性状相关的ADIG基因单倍 型变异遗传标记及应用 (57)摘要 本发明公开一种猪肌内脂肪含量性状相关 的ADIG基因单倍型变异遗传标记， 利用现有的 PCR和测序技术， 在ADI G基因第四外显子 上251bp 处存在一个G>A碱基突变(即等位基因突变)， 在 426bp处存在一个G>A碱基突变(即等位基因突 变)， 两个突变紧密连锁， 且发现此多态位点与猪 肌内脂肪含量性状显著相关， 为猪肌内脂肪含量 性状的遗传标记辅助育种提供了一个新的单倍 型遗传标记， 对猪生长性状和肉质性状的研究有 一定帮助。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图3页 CN 115323061 A 2022.11.11 CN 115323061 A 1.一种猪肌内脂肪含量性状相关的ADIG基因单倍型变异遗传标记， 其特征在于： 其核 苷酸序列如序列表SEQ  ID NO： 1所示， 该遗传标记的核苷酸序列的251bp处有一个G>A突变 位点， 该遗传标记的核苷酸序列的426bp处有一个G>A突变位 点， 两个突变位 点完全连锁。 2.一种用于获得权利要求1所述遗传标记的引物对， 其特 征在于： 该引物对为： 正向引物： 5 ’ ‑CCCCTTTCATCTCACA AC‑3’ 负向引物： 5 ’ ‑ACAATCTACCCAGGCTCT‑3’。 3.一种权利要求1所述遗传标记 的获得方法， 其特征在于： 以硒都黑猪基因组DNA混合 池为模板， 采用以下引物对： 正向引物： 5 ’ ‑CCCCTTTCATCTCACA AC‑3’ 负向引物： 5 ’ ‑ACAATCTACCCAGGCTCT‑3’ 进行PCR扩增， 其获得的遗传标记为SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2。 4.一种利用权利要求1所述遗传标记鉴定猪肌内脂肪含量性状的方法， 其特征在于： 包 括如下步骤： 1)引物对的设计 根据猪ADIG基因的基因 组序列(GenBan k登陆号： NC_010459.5)设计以下引物对： 正向引物： 5 ’ ‑CCCCTTTCATCTCACA AC‑3’ 负向引物： 5 ’ ‑ACAATCTACCCAGGCTCT‑3’； 2)PCR扩增 利用上述引物在硒都黑猪混合基因组DNA池中进行PCR扩增， PCR反应体系50 μL， 体系中 各组分的浓度为100ng模板DNA、 10 ×buffer(含Mg2+)4 μL、 上述上下游引物各0.5 μM、 2.5 μM   dNTPs、 1U  TaqDNA聚合酶； PCR的运行程序为： 95℃预热2 min； 94℃变性20s， 58℃退火40s， 72℃延伸60s， 共35个循 环； 72℃延伸10mi n； 4℃保存， PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测； 3)PCR产物纯化及测序， 得到如SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2的核苷酸序列， 根据序列峰 形图进行 单倍型基因分型。 5.一种权利要求1所述遗传标记在猪肌 内脂肪含量性状相关遗传标记辅助育种中的应 用。 6.一种权利要求2所述遗传标记的引物对在猪肌 内脂肪含量性状相关遗传标记辅助育 种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115323061 A 2猪肌内脂肪含量性状相关的ADIG基因 单倍型变异 遗传标记及 应用 技术领域 [0001]本发明属于家 畜遗传标记筛选技术领域， 具体涉及一种猪ADIG基因第四外显子变 异作为肌内脂肪含量 性状的遗传标记及应用。 背景技术 [0002]猪肉消费长期占我国肉类消费的60％左右， 是城乡居民不可或缺的 “肉盘子”产 品。 当前， 随着社会 经济发展和人民生活水平的不断提高， 猪肉消费已由满足量的需求逐步 转为量与质并举的多元化、 优质化转变。 因此， 猪肉品质遗传改良已越来越被重视。 肌内脂 肪含量(Intramuscular  Fat,IMF)  是影响肉品质性状的一项重要指标， 它与猪肉的嫩度、 风味、 多汁性存在显著相关(Lu  et al.2008)。 然而， 猪肉质性状较难活体测量， 很难用常规 育种技术进 行遗传改良， 因此寻找控制猪肉质性状(尤其是IMF)的关键分子遗传标记， 应用 于该性状的分子 辅助育种， 对提高猪肉品质性能具有重要意 义。 [0003]脂肪生成素(Adipogenin,ADIG)是一种在脂肪组织中分泌的核蛋白因子， 其在调 控脂肪生理功 能方面起着重要作用。 它仅在脂肪细胞中表达， 而不在基质血管细胞群中表 达(Kim et al.,2005)。 Liu等(2017)通过对牛肌卫星细胞的诱导分化发现， ADIG基因过表 达可以促进肌卫星细胞转分化并增加其脂肪的积累。 Zhang等(2021)在对云岭牛背最长肌 的转录组分析中也发现， ADIG基因在脂肪细胞质膜中特异性表达， 可以调节脂肪组织的分 化与增殖。 ADIG基因在体外的过表达会促进脂肪堆积， 相反， 敲减ADIG  基因则会抑制脂肪 生成。 然而， 还未见有关猪ADIG基因对脂肪细胞的影响报道。 [0004]申请人前期利用RNA ‑seq技术对比分析了猪高低IMF极端个体背最长肌组织基因 表达差异情况， 发现ADIG基因在高低IMF个体背肌组织中显著差异表达。 因此， 申请人扩增 了猪ADIG基因的部分核苷酸序列， 利用该序列进行了遗传变异位点的筛选鉴定及与IMF性 状的关联分析研究， 以期获得与猪IMF性状相关的新分子 育种标记。 发明内容 [0005]本发明的目的在于扩增猪AD IG基因的部分核苷酸序列， 以寻找该序列突变位点多 态性， 获得一种与猪肌内脂肪含量性状相关的遗传标记， 并利用该遗传标记辅助选择目标 性状的猪， 提高育种效率。 [0006]本发明通过以下技 术方案实现： [0007]第一方面， 本发明获得了一种猪肌内脂肪含量性状相关基因ADIG的单倍型遗传标 记， 它是含猪ADIG基因第四外显子的DNA片段， 其核苷酸序列如序列表SEQ  ID NO： 1(长度为 685bp)和SEQ  ID NO： 2(长度为  685bp)所示。 在SEQ  ID NO： 1和第SEQ  ID NO： 2第251碱基处 存在一个 G>A碱基突变(如图3所示)， 在该序列第426碱基处存在一个 G>A碱基突变(如图4所 示)。 [0008]第二方面， 本发明还提供了一种用于获得 上述遗传标记的引物对， 该引物对为：说　明　书 1/7 页 3 CN 115323061 A 3