(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210672781.3 (22)申请日 2022.06.15 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114752711 A (43)申请公布日 2022.07.15 (73)专利权人 圣湘生物科技股份有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市长沙高新技术 产业开发区麓松路680号 (72)发明人 戴立忠　杨悦　郭鑫武　马洪昌　 陈明　万旺　娄萍萍　苏静明　 龙天倚　殷仑仑　龚凯军　刘璇　 任小梅　刘佳　 (74)专利代理 机构 北京派特恩知识产权代理有 限公司 1 1270 专利代理师 何娜　王黎延 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (56)对比文件 CN 103468830 A,2013.12.25 CN 111733298 A,2020.10.02 朱娜.猴痘病毒荧 光定量PCR检测方法的建 立. 《南京农业大 学学报》 .20 09,第165-168页. 幸芦琴.猴痘病毒实时荧 光PCR检测方法的 建立. 《现代预防医学》 .20 08,第2110-2112页. 陈国强.猴痘病毒PCR检测试剂盒的研制及 应用. 《第十届中国实验动物科 学年会论文集》 .2012,第619- 622页. 佚名.GenBan k: KJ642613.1. 《NCBI》 .2015, 参见序列. 佚名.GenBan k: MT903346.1. 《NCBI》 .2020, 参见序列. 佚名.GenBan k: KP849470.1. 《NCBI》 .2015, 参见序列. 审查员 熊壮壮 (54)发明名称 检测猴痘病毒并分型的组合物、 试剂盒、 方 法及其用途 (57)摘要 本发明属于分子生物学检测领域， 具体地， 涉及检测猴痘病毒并分型的组合物、 试剂盒、 方 法及其用途。 本发明提供一种检测猴痘病毒并分 型的组合物， 与此同时， 还提供了包括所述组合 物的试剂盒， 所述组合物的用途， 以及用于检测 猴痘病毒并分型的方法。 使用本发明的组合物， 能够以200拷贝/mL的灵敏度对猴痘病毒进行快 速检测。 同时在反应体系中实现猴痘病毒的检测 和分型。 使得不同猴痘分支能够得到区分， 可 以 更有针对性的进行治 疗和预防。 权利要求书1页 说明书16页 序列表2页 附图3页 CN 114752711 B 2022.09.02 CN 114752711 B 1.一种检测猴 痘病毒的组合物， 所述组合物包括： 如SEQ ID NO:1~3所示的检测猴 痘病毒通用的引物和探针组合； 如SEQ ID NO:4~6所示的检测猴 痘病毒西非分支的引物和探针组合； 以及 如SEQ ID NO:7~9所示的检测猴 痘病毒刚果金分支的引物和探针组合。 2.根据权利要求1所述的组合物， 其 中， 所述组合物进一步包括： 如SEQ  ID NO:10~12所 示的内标引物和探针组合。 3.根据权利要求2所述的组合物， 其中， 所述组合物中探针的荧光基团彼此互不相同且 互不干扰。 4.根据权利要求1~3中任一项所述的组合物， 其中， 所述组合物的各成分以混合的形式 存在。 5.权利要求1~4中任一项所述的组合物在制备检测猴痘病毒并分型的试剂盒中的用 途。 6.一种检测猴痘病毒并分型的试剂盒， 所述试剂盒包括权利要求1~4中任一项所述的 组合物。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其中， 所述试剂盒还包括核酸释放试剂、 核酸提取试 剂、 dNTP、 尿嘧啶糖 基化酶、 DNA聚合酶、 PCR缓冲液以及Mg2+中的至少一种。 8.一种用于以非诊断目的检测猴 痘病毒并分型的方法， 所述方法包括以下步骤： 1） 提取或释放待测样本的核酸； 2） 使用如权利要求1~4中任一项所述的组合物或如权利要求6~7中任一项所述的试剂 盒对步骤1） 获得的核酸进行荧 光定量PCR分析； 3） 获得并分析 结果。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752711 B 2检测猴痘病毒并分型的组合物、 试剂盒、 方 法及其用途 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学检测领域， 具体地， 涉及检测猴痘病毒并分型的组合物、 试 剂盒、 方法及其用途。 背景技术 [0002]猴痘(monkeypox)亦称猴天花， 并已被定为人畜共患病。 以猴痘病毒为病原， 发源 于中、 西非的热带雨林地区。 猴痘病毒 是一种基因组长达200Kb左右的DNA病毒， 属于痘病毒 科正痘病毒属， 外形为回角砖形或卵圆形， 大小为200 ‑400nm， 外被脂蛋白膜或封套， 中间具 有两个含蛋白质的侧体， 有1个厚膜核心， 核心内含很大的双链DNA基因组。 猴痘病毒的基因 组为双链DNA， 长约197kb， 基因组末端包含一个相同但方向相反的末端反向重复序列。 该病 毒包含190个开放阅读框， 其中4个位于末端反向重复序列中； 同一属的病毒还包括天花病 毒、 牛痘病毒等。 猴痘是一种罕见的病毒性人畜共患病 （从动物传播给人的病毒） ， 病人症状 与过去在天花病人身上所观察到的相似， 但临床严重程度较轻。 随着在1980年消灭了天花 和随后停止 接种天花疫苗， 猴 痘成为最严重的正痘病毒。 [0003]猴痘病毒 （MPV） 主要有两个分支： 西非分支 （West  African Clade） 和刚果金 （中 非） 分支 （Congo  Basin clade） 。 西 非分支的致死率较低， 死亡率达3.6%； 相比之下， 刚果金 分支感染会出现大约两周的无症状潜伏期， 死亡风险高达10.6%。 可见， 两种支系的致死性 有明显差异。 由于西非分支和刚果金分支这两种进化支病毒引起疾病的流行病学和临床特 征均不相同， 加强不同进化支病毒遗传学差异的特征研究， 对西非支系和刚果金支系进行 精准分型， 对 疾病的防控是十分必要的。 [0004]而猴痘只能由实验室确诊。 国际上尚无一种通用的、 安全快速 的对天花和猴痘病 毒感染的血清学诊断方法， 而生物学鉴别诊断 （病毒分离培养、 电镜观察等） 通常需3 ‑6天， 且存在生物安全危害隐患。 由于血清学诊断与临床诊断的灵敏度不高， 不易鉴别诊断天花、 猴痘及其他出皮疹的疾病， 所以采用分子诊断 （P CR或荧光定量PCR） 技术来进 行病毒感染的 快速特异诊断方法快速发展。 而现有的分子诊断大多存在灵敏度不高等 缺陷。 [0005]因此， 本领域需求一种灵敏度高的快速诊断猴痘病毒并对西非支系和刚果金支系 进行分型的产品， 以便应对突发的猴 痘疫情。 发明内容 [0006]有鉴于此， 第一方面， 本发明提供一种检测猴 痘病毒的组合物， 所述组合物包括： [0007]猴痘病毒通用上游引物 （MPV ‑F） ： 5'‑AGAGATTGGTCTTTTCGTAT‑'3 （SEQ ID NO:1） ； [0008]猴痘病毒通用下游引物 （MPV ‑R） ： 5'‑ATTTAGCTGCATTATTTTTAG ‑'3 （SEQ ID NO:2） ； 以及 [0009]猴痘病毒通用探针 （MPV ‑P） ： 5'‑TCCGTCAATGTCTACACAGGCATAAAA ‑'3 （SEQ ID NO: 3） 。 [0010]使用本发明的组合物， 能够以200拷贝/mL 的灵敏度对猴痘病毒进行快速检测。 同说　明　书 1/16 页 3 CN 114752711 B 3