(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210697882.6 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 江苏里下河地区农业科 学研究所 地址 225000 江苏省扬州市扬子江北路5 68 号 (72)发明人 陆成彬　胡文静　高德荣　王慧　 吴迪　王君婵　朱冬梅　张晓　 张晓祥　江伟　李曼　李东升　 汪尊杰　 (74)专利代理 机构 南京源点知识产权代理有限 公司 32545 专利代理师 王佳妹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测小麦籽粒蛋白质含量高低 的分子标记 引物组及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测小麦籽粒蛋白质含 量高低的KASP分子标记及其应用。 本发明检测到 1个新的控制籽粒蛋白质含量高低的主效QTL位 点Qgpc.1BL， 经过对两侧标记的鉴定和筛选， 明 确其紧密连锁标记AX ‑89694598的基因型与籽 粒 蛋白质含量的表型显著性最高， 并据此开发了1 个KASP标记引物组， 用以对小麦籽粒蛋白质含量 高低进行高效筛选。 通过本发明的引物组对小麦 基因组DNA进行PCR扩增， 可以直接通过KASP分型 判断是否携带扬麦5号的籽粒蛋白质含量低的等 位变异， 检测方法操作简单， 检测结果非常直观， 检测效果明显有效， 利用该分子标记进行筛选可 以大大提高小麦品质育种中对籽粒蛋白质含量 高低选择的工作效率。 权利要求书2页 说明书15页 序列表1页 附图2页 CN 115029472 A 2022.09.09 CN 115029472 A 1.一种检测小麦籽粒蛋白质含量高低的分子标记相关的物质， 其特征在于， 所述物质 为用于检测小麦基因组中染色体1B长臂上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱 氧核糖 核苷酸是T T、 AA或TA的成套引物或含有所述成套引物的试剂或试剂盒。 2.根据权利要求1所述的物质， 其特 征在于， 所述成套引物中含有两条 上游引物和一条 下游引物； 所述上游引物根据所述小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第 55 位脱氧核糖核苷酸的上游序列进 行设计， 且一条所述上游引物的3 ’末端脱氧核糖核苷酸为 T， 另一条 所述上游引物的3 ’末端脱氧核糖核苷酸 为A； 所述下游引物根据所述小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第 55 位脱氧核糖核苷酸及其下游序列进行设计。 3.根据权利要求2所述的物质， 其特征在于， 所述成套引物为由SEQ  ID No.1的第22 ‑45 位所示的单链DNA分子或其衍生物和SEQ  ID No.2的第22 ‑45位所示的单链DNA分子或其衍 生物、 SEQ ID No.3的单链DNA分子组成的成套引物。 4.根据权利要求3所述的物质， 其特征在于， 所述SEQ  ID No.1的第22 ‑45位所示的单链 DNA分子的衍生物为SEQ  ID No.1的第22 ‑45位所示的单链DNA分子的5'端连接特异荧光标 签序列A； 所述SEQ  ID No.2的第22 ‑45位所示的单链DNA分子的衍生物为SEQ  ID No.2的第 22‑45位所示的单链DNA分子的5'端连接特异荧 光标签序列B。 5.根据权利要求4所述的物质， 其特征在于， 所述特异荧光标签序列A为荧光标签序列 FAM， 所述特异荧 光标签序列B为 荧光标签序列H EX。 6.根据权利要求5所述的物质， 其特征在于， 所述上游引 物的序列分别如SEQ  ID No.1 和SEQ ID No.2所示， 所述下游引物的序列别如SEQ  ID No.3所示。 7.权利要求1 ‑6所述的物质在 如下任一中的应用： (A)鉴定或辅助鉴定小麦 籽粒蛋白质含量高低性状； (B)比较待测小麦 籽粒蛋白质含量高低； (C)选育或筛选籽粒蛋白质含量相对较高的小麦单株或株系或品系或品种； (D)选育或筛选籽粒蛋白质含量高低相对较低的小麦单株或株系或品系或品种； (E)制备用于鉴定或辅助鉴定或比较待测小麦 籽粒蛋白质含量高低的产品； (F)制备用于选育或筛选籽粒蛋白质含量相对较低的小麦单株或株系或品系或品种的 产品； (G)制备用于选育或筛选籽粒蛋白质含量相对较 高的小麦单株或株系或品系或品种的 产品。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于， 所述产品为检测试剂或检测试剂盒。 9.如下任一方法： 方法A： 一种检测小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧 核糖核苷酸是T T、 AA还是TA的方法， 包括如下步骤(A1)或(A 2)： (A1)直接测序； (A2)用权利要求1 ‑6任一所述的物质对待测小麦基因组DNA进行PCR扩增， 将所扩增的 产物进行荧光信号扫描， 对扫描数据进行分析， 然后按照如下确定所述待测小麦基因中染 色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第5 5位脱氧核糖核苷酸是T或A：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115029472 A 2若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据显示为蓝色， 则所述待测小麦基因组中染 色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第5 5位脱氧核糖核苷酸是T的纯合体； 若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据显示为红色， 则所述待测小麦基因组中染 色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第5 5位脱氧核糖核苷酸是A的纯合体； 若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据显示为绿色， 则所述待测小麦基因组中染 色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第5 5位脱氧核糖核苷酸是T和A的杂合体； 方法B： 一种比较待测小麦 籽粒蛋白质含量高低的方法， 包括如下步骤： (B1)检测小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核 苷酸是TT、 AA还是TA； (B2)按照如下确定所述待测小麦籽粒蛋白质含量高低： 基因组中染色体1B上SEQ  ID  No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核苷酸是T的纯合体则所述待测小麦籽粒蛋白质含 量低于基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核苷酸是A的 纯合体或者是A和T的杂合体的所述待测小麦； 方法C： 一种选育或筛选籽粒蛋白质含量相对较低的小麦单株或株系或品系或品种的 方法， 包括如下步骤： (C1)检测小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核 苷酸是TT还是AA还是T和A； (C2)选择基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核苷酸 是T的纯合体的待测小麦作为亲本进行选育， 并在育种各世代选择基因组中染色体1B上S EQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱 氧核糖核苷 酸是T的纯合体的小麦， 最 终获得籽粒蛋白 质含量相对较低的小麦单株或株系或品系或品种； 方法D： 一种选育或筛选籽粒蛋白质含量相对较高的小麦单株或株系或品系或品种的 方法， 包括如下步骤： (D1)检测小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核 苷酸是AA还是TT还是A和T； (D2)选择基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核苷酸 是A的纯合体的待测小麦作为亲本进行选育， 并在育种各世代选择基因组中染色体1B上S EQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱 氧核糖核苷 酸是A的纯合体的小麦， 最 终获得籽粒蛋白 质含量相对较高的小麦单株或株系或品系或品种。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于： 所述方法B、 所述方法C和所述方法D， 所述 检测小麦基因组中染色体1B上SEQ  ID No.4所示的基因片段的第55位脱氧核糖核苷 酸是TT 还是AA， 还是T和A的方法为所述方法A。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115029472 A 3