(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210764890.8 (22)申请日 2022.07.01 (71)申请人 铜仁学院 地址 554300 贵州省铜仁市碧江区川硐教 育园区铜仁 学院 (72)发明人 安清明　黄琴　杨驰　段明筠　 陈昌林　 (74)专利代理 机构 北京睿智保诚专利代理事务 所(普通合伙) 11732 专利代理师 刘晓静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测与白山羊体尺性状 关联的SNP分子标记 的试剂、 试剂盒和应用 (57)摘要 本发明提供了检测与白山羊体尺性状关联 的SNP分子标记的试剂、 试剂盒和应用， 属于山羊 分子育种技术领域， 所述SNP分子标记为如SEQ   ID NO.1所示的核苷酸序列， 所述SNP分子标记自 5’端起的第342bp处存在A /G碱基突变； 所述试剂 包括引物组， 所述引物组包括如SEQ  ID NO.2所 示的上游引 物F和如SEQ  ID NO.3所示的下游引 物R。 所述SNP分子标记存在等位基因A具有更高 的胸围指标， 杂合基因型AG较纯合型具有更高的 胸围指标， 可作为优势候选基因标记 位点运用到 贵州白山羊分子标记遗传育种实 践中。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 115074450 A 2022.09.20 CN 115074450 A 1.一种检测与白山羊体尺性状关联的SNP分子标记的试剂， 其特征在于， 所述SNP分子 标记为如SEQ  ID NO.1所示的核苷 酸序列， 所述SNP分子标记自5 ’端起的第342bp处存在A/G 碱基突变。 2.根据权利要求1所述的试剂， 其特征在于， 所述试剂包括引物组， 所述引物组包括如 SEQ ID NO.2所示的上游引物F和如SEQ  ID NO.3所示的下游引物R。 3.根据权利要求1所述的试剂， 其特 征在于， 所述白山羊为 贵州白山羊。 4.根据权利要求1或3所述的试剂， 其特 征在于， 所述白山羊体尺性状为胸围。 5.一种检测与白山羊体尺性状关联的SNP分子标记的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要 求2所述的引物组和检测试剂。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述检测试剂包括2 ×Taq PCRStarMix。 7.权利要求1～4任意一项所述的试剂、 权利要求5或6所述的试剂 盒在白山羊遗传育种 中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述应用为用权利要求1～4任意一项所述 的试剂、 权利要求5或6所述的试剂盒对待筛选的白山羊的基因组DNA进行PCR扩增， 获得扩 增产物后测序， 筛 选SNP分子标记的基因型为AG的白山羊为高胸围指标的白山羊。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增的扩增体系， 以25μL计， 包括 以下组分2 ×TaqPCRStarMix12.50 μL， ddH2O8.75 μL， 10pmol/L的上游引物F1.25 μL， 10pmol/ L的下游引物R 1.25 μL， 基因 组DNA1.25 μL。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增的扩增程序如下： 94℃预变 性5min； 94℃变性3 0s， 61℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 37个循环； 72℃终延伸5mi n； 10℃保持。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074450 A 2检测与白山羊体尺性状关联的SNP分子标记的试剂、 试剂盒和 应用 技术领域 [0001]本发明属于山羊分子育种技术领域， 尤其涉及检测与白山羊体尺性状关联的SNP 分子标记的试剂、 试剂盒和应用。 背景技术 [0002]PRDM16基因(PR结构域蛋白16)又称MELI， 而MELIS为MELI基因表达的另一蛋白产 物， 但MELIS缺少了PR结构域(PRD)， 该结构对于PRDM16功能的发挥具有重要作用。 PRDM16基 因存在高度同源性， 该基因位于人类1号染色体上， 是PR结构域家族中第16个成员。 人类的 PRDM16蛋 白由1276个氨基酸组成。 许多研究表明， PRDM16是棕色脂肪细胞分化过程中的重 要转录调控因子， 在维持棕色脂肪细胞的特殊形态(如脂滴和线粒体的形成)、 促进关联基 因的表达过程中具有重要作用， 并最终影响关联基因的产热功能。 [0003]詹芳芳等研究发现PRDM16基因rs2651899位点的等位基因A以及单倍体型AAT可能 是超重肥胖发生的危险因素， 单倍体型GAC、 GCT可能是超重肥胖发生的保护因素， 表明 PRDM16基因变异与超重肥胖遗传机制具有一定关联性(詹芳芳,刘莉,戚敏杰,卢明,平智 广.PRDM16基因rs2651899、 rs2236518、 rs2282198位点多态性与超重肥胖的关系[J].郑州 大学学报(医学版) ,2015 ,50(03):354 ‑358 .DOI:10 .13705/j .issn .1671 ‑ 6825.2015.03.012.)。 Harms等研究发现， 小鼠体内去甲肾上腺素激活棕色脂肪细胞产热过 程中， PRDM16的缺失能影响小鼠耗氧量的降低， 导致小鼠瘦肉比率、 体重和体长的下降 (Harms M J， Ishibashi  J， Wang W， et al.Prdm16  is required  forthe maintenance  of  brown adipocyte  identity and function  in adult mice[J].Cell  Metabolism， 2014， 19(4):593 ‑604.)。 Han等研究发现鸡PRDM16基因核苷酸变异与心重、 肝重和小腿长等性状 显著相关(Han  R L， WeiY， Kang  X， et al.Novel  SNPs in the PRDM16 gene and their  associations  with performance  traits in chickens[J].Molecular  Biology  Reports， 2012， 39(3):3153 ‑3160.)。 Wang等研究发现， PRDM16基因变异与牛的体重和日增 重显著相关， 但山羊PRDM16基因相关的研究尚未见报道(Wang  J， Wang C， Tian R， et  al.Sequence  variants  in the bovine PRDM16 gene associated  with body weight in  Chinese cattle breeds[J].Genetics& Molecular Research Gmr， 2012， 1 1(1):746 ‑755)。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种与白山羊体尺性状关联的SNP分子标记的 试剂、 试剂盒和应用； 所述分子标记自5 ’端起的第342bp处存在A/ G碱基突变， 并且存在基因 型AG的群体在胸围体尺性状中均显著高于AA和GG型群体， 表明等位基因A和等位基因G可能 存在互作影响， 杂合型具有更高的胸围指标， 因此基因型AG可作为白山羊胸围体尺性状的 优势基因予以应用。 [0005]本发明提供了一种检测 与白山羊体尺性状关联的S NP分子标记的试剂， 所述S NP分说　明　书 1/6 页 3 CN 115074450 A 3