(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211007697.6 (22)申请日 2022.08.22 (71)申请人 迈基诺(重庆)基因科技有限责任公 司 地址 400026 重庆市江北区港城东环路6号 1幢1-2、 2-2、 3 -2、 4-2、 5 -2、 6-2 (72)发明人 伍建　徐敏杰　姬晓雯　 (74)专利代理 机构 北京星通盈泰知识产权代理 有限公司 1 1952 专利代理师 黄正奇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的 引物组、 试剂盒及方法 (57)摘要 本发明涉及分子生物学领域， 具体涉及一种 检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的引物 组、 试剂盒及方法， 本发明通过设计特异性的引 物组， 对样本进行PCR扩增， 产生片断长度不等的 PCR产物， 产物的一端包含有FA M荧光， 对PCR产物 进行毛细管电泳， 分析ATTCT的重复数， 且 误差不 超过1次重复； 利用检测ATXN10基因中ATTCT重复 数对SCA10进行评估， 可以快速对脊髓小脑性共 济失调10 型ATXN10基因ATTCT五核苷酸重复数做 出检测、 评估， 检测过程 耗时短， 检测效率高。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 115216537 A 2022.10.21 CN 115216537 A 1.一种检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的引物组， 其特征在于， 所述引物组包 括引物SCA10P1、 引物SCA10P2、 引物SCA10P3和引物SCA10P4； 所述引物SCA10P1的5 ’端由荧 光基团标记； 所述引物SCA10P1的核苷酸序列为GA AGACAAATAGAAAACAGATGGCA； 所述引物SCA10P2的核苷酸序列为TACGCATC CCAGTTTGAGACG； 所述引物SCA10P3的核苷酸序列为TACGCATCCCAGTTTGAGACGGAATAGAATAGAATAGAATAGA ATAGAATAGAATAGAATAG； 所述引物SCA10P4的核苷酸序列为GACT TCCCGAAACACCGTC。 2.根据权利要求1所述检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的引物组， 其特征在 于， 所述引物SCA10P1的5 ’端带5’ ‑FAM荧光基团。 3.一种检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的试剂盒， 其特征在于， 包括权利 要求 1或2所述检测ATXN10基因AT TCT重复序列动态突变的引物组。 4.一种检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的非疾病诊断的方法， 其特征在于， 包 括： S1、 提取待测DNA； S2、 利用权利要求1所述的引物组对提取的待测DNA进行PCR扩增； S3、 对所述S2中PCR扩增后的产物进行毛细管电泳； S4、 分析ATXN10基因中的AT TCT重复情况。 5.根据权利要求4所述检测ATXN10基因ATTCT重 复序列动态突变的非疾病诊断的方法， 其特征在于， 所述S2中PCR扩增包括： 按DNA检测样本数量配置扩增反应液混合液， 所述扩增反应液混合液包括： 2 × GoldStar  Best Master Mix试剂用量12.5 ×n μl、 浓度为10 μM的SCA 10P1引物用量1 ×n μl、 浓度为10 μM的SCA10P2引物用量1 ×n μl、 浓度为10 μM的SCA10P3引物用量0.1 ×n μl、 浓度为 10 μM的SCA10P4引物用量1 ×n μl、 DMSO用量1 ×n μl和ddH2O用量7.4 ×n μl； 其中n＝检测样本 数量+1； 按24 μl扩增反应混合液中加入1 μlDNA； 进行PCR扩增。 6.根据权利要求5所述检测ATXN10基因ATTCT重 复序列动态突变的非疾病诊断的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增包括： 在PCR仪中先以95℃变性1分钟； 再运行35次如下循环： 94℃变性30秒、 56℃退火30秒和 72℃延伸1分钟； 最后72℃延伸5分钟， 4℃保存。 7.根据权利要求4所述检测ATXN10基因ATTCT重 复序列动态突变的非疾病诊断的方法， 其特征在于， 所述S3包括： 对PCR扩增后的产物进行稀释， 在d dH2O中加入稀释后的PCR扩增后的产物； 取ABI GS500‑LIZ内标和HIDI按 1∶250的体积比混合得混合液， 取所述混合液与所述稀 释后的PCR扩增后的产物混合制成上机混合液； 将所述上机混合液在PCR仪上以95℃运行3分钟后， 冷却5分钟， 在0℃ ±1℃， 进行变性 处理； 采用G5颜色 分组， 在ABI373 0xl测序仪中进行检测。 8.根据权利要求4所述检测ATXN10基因ATTCT重 复序列动态突变的非疾病诊断的方法， 其特征在于， 所述S4包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115216537 A 2采用genemarker  ID v2.6.3软件对分型结果进行判 读， 核对校正内标峰后， 定义166bp 处为ATTCT1处， 根据每隔5bp出现的荧 光串峰个数计算AT TCT重复数。 9.一种检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态突变的系统， 其特征在于， 包括： 待测DNA提 取模块、 PCR扩增扩增模块、 毛细管电泳模块和分析模块； 所述待测DNA提取模块， 用于提取待测DNA； 所述PCR扩增扩增模块， 用于利用权利 要求1所述的引物组对提取的待测 DNA进行PCR扩 增； 所述毛细管电泳模块， 用于对PCR扩增后的产物进行毛细管电泳； 所述分析模块， 用于分析ATXN10基因中的ATTCT重复情况； 若所述ATXN10基因中的 ATTCT重复数为10 ‑32， 则待测DNA的检测结果 为正常。 10.权利要求1或2所述检测ATXN10基因ATTCT重 复序列动态突变的引物组或权利要求3 所述检测ATXN10基因ATTCT重复序列动态 突变的试剂盒在制备脊髓小脑 性共济失调10型病 样诊断剂中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115216537 A 3