(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210765293.7 (22)申请日 2022.06.30 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114836450 A (43)申请公布日 2022.08.02 (73)专利权人 中国农业科 学院作物科 学研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12号 (72)发明人 王春超　郭刚刚　徐东东　 达瓦顿珠 　张京　 (74)专利代理 机构 北京汇智胜知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11346 专利代理师 赵立军 (51)Int.Cl. C12N 15/54(2006.01) C12N 9/10(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)(56)对比文件 WO 202024 4759 A1,2020.12.10 CN 112831507 A,2021.0 5.25 CN 113549631 A,2021.10.26 CN 10193 5663 A,2011.01.05 CN 1095179 22 A,2019.0 3.26 WO 2009061216 A1,20 09.05.14 Kathleen A. Mar rs 等.A glutathi one S- transferase i nvolved in vacuolar transfer encoded by the maize gene Bro nze-2. 《Nature》 .19 95,第375卷第397-40 0页. 无.NCBI Reference Sequence:XM _ 04510415 6.1. 《GenBan k》 .2021,序列部分. 袁媛等.郁金香 ‘上农早霞 ’花色变异相关基 因的信息分析. 《上海交通大 学学报(农业科 学 版)》 .2015,(第02期), 侯泽豪等.植物花青素生物合成与调控的研 究进展. 《广西植物》 .2017,第37 卷(第12期),第 1603-1613页. (续) 审查员 郭晓烨 (54)发明名称 有色大麦籽粒花青素转运相关基因HvGST及 其应用 (57)摘要 本发明公开了有色大麦籽粒花青素转运相 关基因， 为如下 （a） 、 （b） 或 （c） 的基因： （a） 其碱基 序列如SEQ  ID NO:1所示， （b） 其碱基序列如SEQ   ID NO:2所示， （c） 其碱基序列如SEQ  ID NO:3所 示； 在大麦植株中提供花青素由细胞质到液泡的 转移的功能。 本发明还公开了有色大麦籽粒花青 素转运相关基因在针对候选基因关键变异开发 籽粒颜色相关诊断标记、 大麦辅助选择育种或制 备大麦辅助选择育种试剂盒中的应用。 本发明可 实现对有色大麦、 白大麦材料快速高效准确的鉴 定， 对有色大麦新品种选育和分子育种具有促进 作用。 [转续页] 权利要求书1页 说明书8页 序列表10页 附图5页 CN 114836450 B 2022.09.30 CN 114836450 B (56)对比文件 Yun Zhao 等.PpGST1, an anthocyan in- related glutathi one S-transferase gene, is essential for fruit co loration in peach. 《Plant Bi otechnology Journal》 .2019, 第18卷(第5期),第1284-12 95页. Mohammad KazemRezaei 等.Glutathi one S-transferase (GST) fami ly in barley: identificati on of members, enzy me activity, and gene expres sion pattern. 《Journal of Plant Physi ology》 .2013,第170 卷(第14期),第127 7-1284页. 王璐 等.植物花青素苷转 运机制的研究进 展. 《生物工程学报》 .2014,第3 0卷(第6期),第 848-863页. 无.NCBI Reference Sequence: XP_ 044960091.1. 《GenBan k》 .2021,序列部分. 无.NCBI Reference Sequence: NP_ 001183661.1. 《GenBan k》 .2021,序列部分.2/2 页 2[接上页] CN 114836450 B1.大麦籽粒花青素转运相关基因自然变异突变体， 其特征在于， 所述自然变异突变体 为如下 （e） 、 （f） 或 （g） 的基因： （e） 其碱基序列为如SEQ  ID NO:1所示的核苷酸序列末端203  bp碱基缺少导致移码突 变的碱基序列， 如SEQ  ID NO:5所示， （f） 其碱基序列如SEQ  ID NO:6所示， （g） 其编码如SEQ  ID NO:7所示的氨基酸序列组成的蛋白质； 所述自然变异突变体在大麦植株中不提供花青素由细胞质到液泡的转移的功能， 使大 麦籽粒表现为白色表型。 2.与大麦籽粒颜色相关基因关联的功能性InDel分子标记， 其特征在于， 所述InDel分 子标记的扩增引物包 含两对引物对， 分别为： 如SEQ ID NO:24和SEQ  ID NO:25所示的一对引物对， 和， 如SEQ ID NO:24和SEQ  ID NO:26所示的一对引物对。 3.鉴定大麦 籽粒颜色的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 1） 提取待鉴定大麦植株的基因 组DNA； 2） 以步骤1） 中的基因组DNA为模板， 利用如SEQ  ID NO:24和SEQ  ID NO:25的一对引物 对和如SEQ  ID NO:24和SEQ  ID NO:26所示的一对引物对分别或同时进行PCR扩增； 3） 将步骤2） 中得到的PCR扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳进行条带检测， 若仅能检测到 PCR扩增产 物中有且仅有符合第一预期大小的片段存在， 则认 为其模板基因组DNA的来源植 株的籽粒颜色表现为白色表型， 若能检测到PCR扩增产物中有符合第二预期大小的片段存 在， 则认为 其模板基因 组DNA的来源植株的籽粒颜色表现为蓝色或紫色表型。 4.试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒含有如权利要求2所述的与 大麦籽粒颜色相关基因 关联的功能性 InDel分子标记的扩增引物。 5.如权利要求1所述的有色大麦籽粒花青素转运相关基因自然变异突变体在针对候选 基因关键变异开 发籽粒颜色相关诊断标记、 大麦辅助选择育种或制备大麦辅助选择育种试 剂盒中的应用。 6.如权利要求2所述的与大麦籽粒颜色相关基因关联的功能性InDel分子标记的扩增 引物在大麦 辅助选择育种或试剂盒制备中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836450 B 3