(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210752586.1 (22)申请日 2022.06.28 (71)申请人 湖南圣洲生物科技有限公司 地址 412000 湖南省株洲市天元区仙月环 路新马动力创新园(中国动力谷)6.1 期16栋 (72)发明人 徐进　张京红　赵哲浩　张媛媛　 徐刚伟　林曜华　姚湾　谭凯妮　 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 引物探针组合、 试剂盒及其检测人ALK、 ROS1 基因融合的方法 (57)摘要 本发明涉及C12Q1/6851领域， 更具体地， 本 发明涉及引物探针组合、 试剂盒及其检测人ALK、 ROS1基因融合的方法。 引物探针组合， 至少包括 引物探针组合A， 其特异性检测至少一种EML4 ‑ ALK融合基因； 引物探针组合B， 其特异性检测至 少一种ROS1融合基因； 引物 探针组合C， 其特异性 检测内参基因。 本申请引物探针组合以及检测方 法， 特异性和灵敏性高， 提高了信噪比， 分辨性 好， 准确性好， 同时具有优异的线性关系， 容易进 行结果判断。 权利要求书3页 说明书13页 序列表5页 附图5页 CN 115466788 A 2022.12.13 CN 115466788 A 1.一种引物探针组合， 其特征在于， 至少包括引物探针组合A， 其特异性检测至少一种 EML4‑ALK融合基因； 引物探针组合B， 其特异性检测至少一种ROS1融合基因； 引物探针组合 C， 其特异性检测内参基因。 2.根据权利要求1所述引物探针组合， 其特征在于， 所述引物探针组合物A包括(a)正向 引物Av1F1、 Av1F2、 Av1F3、 Av2F1、 Av2F2、 Av2F3、 Av2F4、 Av3F1、 Av3F2、 Av3F3、 Av3F4、 Av3F5、 Av3F6、 Av4F1、 Av4F2、 AV5F1、 Av5F2、 Av5F3、 Av5F4、 Av6F1、 Av6F2、 Av6F3、 Av6F4、 Av7F1、 Av7F2、 Av7F3中一种或多种； (b)反向引物AR1、 AR2、 AR3、 AR4、 AR5、 AR6中一种或多种； 以及 (c)探针pALKt1、 pALKt 2、 pALKt3中一种或多种； 其中， Av1F1的核苷酸序列为CCTGGGAAAGGACCTAAA； Av1F2的核苷酸序列为 CACCTGGGAAAGGACCTA； Av1F3核苷酸序列为CTACTGTAGAGCCCACACCT； Av2F1核苷酸序列为 TCTAACTCGGGAGACTATGAA； Av2F2核苷酸序列为TAACTCGGGAGACTATGAAAT； Av2F3核苷酸序列 为ACTCGGGAGACTATGAAATATT； Av2F4核苷酸序列为ACATCACACACCTTGACTGG； Av3F1核苷酸序 列为TACCAAAACTGCAGACAAGC； Av3F2核苷酸序列为TAAAGATGTCATCATCAACCAA； Av3F3核苷酸 序列为AGCATAAAGATGTCATCATCAA； Av3F4核苷酸序列 为ATCATCAACCAAGCAAAA； Av3F5核苷酸 序列为AACTCGCGAAAAAAACAGCC； Av3F6核苷酸序列 为AATGTCAACTCGCGAAAA； Av4F1核苷酸序 列为AAATAATTCTGTGGGATCATG； Av 4F2核苷酸序列为CTGGAGGAGGGAAAGACAGA； AV 5F1核苷酸序 列为GATCATGTGGCCTCAGTGAA； Av5F2核苷酸序列 为ATGTGGCCTCAGTGAAAA； Av5F3核苷酸序列 为GATCATGTGGCCTCAGTG； Av5F4核苷酸序列为GCTGACCACCCACCTGC； Av6F1核苷酸序列为 AGCTGACCACCCACCTG； Av6F2核苷酸序列为CCTGTGTAGTGCTTCAAGGG； Av6F3核苷酸序列为 CACACCTGGGAAAGGACCTA； Av6F4核苷酸序列为CTGTAGAGCCCACACCTG； Av7F1核苷酸序列为 ATGATCTGAATCCTGAAAGAG； Av7F2核苷酸序列为CATGATCTGAATCCTGAAAGAGA； Av7F3核苷酸序 列为ATTAACTGGAGGAGGGAAAGAC； AR1核苷酸序列为CAGCTT GTACTCAGGGCTC； AR2核苷酸序列为GCTCAGCTT GTACTCAGGG； AR3 核苷酸序列为TTGTA CTCAGGGCTCTGCA； AR4核苷酸序列为TAGTTGGGGTTGTAGTCGGT； AR5核苷酸 序列为GCT TGCTCAGCT TGTACTC； AR6核苷酸序列为GCTC CATCTGCATG GCT； pALKt1核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑TTGCTCAGCTTGTACTCAGGGC ‑3‘猝灭基团； pALKt2核苷 酸序列为5 ‘荧光标记 ‑TACCGCCGGAAGCACCAG ‑3‘猝灭基团； pALKt3核苷酸序列为5 ‘荧光标 记‑GAGCCCTGAGTACA AGCTGA‑3‘猝灭基团。 3.根据权利要求2所述引物探针组合， 其特征在于， 所述引物探针组合物B包括(d)正向 引物CD74 ‑C6F1、 CD74 ‑C6F2、 SLC34A2 ‑E4F1、 SLC34A2 ‑E4F2、 SLC34A2 ‑E4F3、 SLC34A2 ‑E13F1、 SLC34A2‑E13F2、 SDC4 ‑E2F1、 SDC4 ‑E2F2、 SDC4 ‑E4F1、 SDC4 ‑E4F2、 SDC4 ‑E4F3、 EZR ‑E10F1、 EZR‑E10F2、 EZR ‑E10F3、 TMP3 ‑E8F1、 TMP3 ‑E8F2中一种或多种； (e)反向引物R32R1、 R34R1、 R35R1中一种或多种； 以及(f)探针pR32t1、 pR32t2、 pR32t3、 pR32t4、 pR32t5、 pR34t1、 pR34t2、 pR34t3、 pR3 5t1、 pR35t2、 pR35t3中一种或多种； 其中， CD74 ‑C6F1核苷酸序列为GAGCAAAAGCCCACTGAC； CD74 ‑C6F2核苷酸序列为 GCAAAAGCCCACTGACGCT； SLC34A2 ‑E4F1核苷酸序列为TCTTAGTAGCGCCTTCCAG； SLC34A2 ‑E4F2 核苷酸序列为TGCTCCCTGGATATTCTTA； SLC34A2 ‑E4F3核苷酸序列为TA CTTTTTCGTGTGCTCCCT； SLC34A2 ‑E13F1核苷酸序列为CATAACCATTAGCAGAGAGGC； SLC34A2 ‑E13F2核苷酸序列为 TAACATAA CCATTAGCAGAGAGGC； SDC4 ‑E2F1核苷酸序列为ATCTGATGACTTTGAGCTGTC； SDC4 ‑E2F2权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115466788 A 2核苷酸序列为CTGATGA CTTTGAGCTGTCTGG； SDC4 ‑E4F1核苷酸序列为 GAGAACGGAGGTCCTGGCAG； SDC4‑E4F2核苷酸序列为CTTTGAGAGAACGGAGGTC； SDC4 ‑E4F3核苷酸序列为 CAGGGCAGCAA CATCTTTGA； EZR ‑E10F1核苷酸序列为GGAGAAGA CAAAGAAGGCA； EZR ‑E10F2核苷酸 序列为AGACAAAGAAGGCAGAGAGA； EZR ‑E10F3核苷酸序列为GAGTTGATGCTGCGGCTG； TMP3 ‑E8F1 核苷酸序列为CA AGCTGGAAAAGACAATTGAT； TMP3 ‑E8F2核苷酸序列为GAC CCGTGCTGAGT TTG； R32R1核苷酸序列为AGCTTTCTCCCACTGTATTG ； R34R1核苷酸序列为 CTTCTATGCCAGACAAAGGT； R35R1核苷酸序列为TGTCTTCGTTTATAAGCACTGT； pR32t1核苷酸序列 为5‘荧光标记 ‑GAGTCCCAAATAAACCAGGCATTCCCA ‑3‘猝灭基团； pR32t2核苷酸序列为5 ‘荧光 标记‑CCAAATAAACCAGGCA ‑3‘猝灭基团； pR32t3核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ AGTCCCAAATAAACCAGGCATTCC ‑3‘猝灭基团； pR32t4核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ TGGAGTCCCAAATAAACCAGGC ‑3‘猝灭基团； pR32t5核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ TGCCTGGTTTATTTGGGACTCC ‑3‘猝灭基团； pR34t1核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ TGTAACAACCAGAAATATT ‑3‘猝灭基团 ； pR34t2核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ TTCTGGTTGTTACAATCCCACTGAC ‑3‘猝灭基团； pR34t3核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ TGGTTGTTACAATCCCACTGACC ‑3‘猝灭基团； pR35t1核苷酸序列为5 ‘荧光标记 ‑ CCTTCCTTGGCACTTTTTTGATTCTTT ‑3‘猝灭基团； pR35t