(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210646490.7 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 连云港市第一人民医院 地址 222000 江苏省连云港市海州区振华 东路6号 申请人 北京恩泽康泰生物科技有限公司 (72)发明人 惠开元　蒋晓东　李志　刘纯　 胡晨曦　游栉铖　闫冬悦　孙文　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 刘璞 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 外泌体lncRNA在RTK抑制剂治疗晚期非小细 胞肺癌疗效监测中的应用 (57)摘要 本发明涉及生物检测技术领域， 具体涉及外 泌体lncRNA在RTK抑制剂 治疗晚期非小细胞肺癌 疗效监测中的应用。 在本发明中， 采用外泌体 lncRNA作为RTK抑制剂 治疗晚期非小细胞肺癌中 的疗效监测标志物， 所述为外泌体lncRNA为lnc ‑ SNAPC5‑3:4。 lnc‑SNAPC5‑3:4用于监测患者在 RTK抑制剂安罗替尼治疗过程中的疗效， 以排除 无效患者， 将临床获益扩大到更广泛的患者群 体， 具有重要的临床价值。 本发明提供的疗效监 测标志物及试剂盒为精准高效地监测RTK抑制剂 安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的疗效提供了 科学参考， 可帮助临床医生判断或及时更换治疗 方案。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图5页 CN 114959037 A 2022.08.30 CN 114959037 A 1.外泌体lncRNA在RTK抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌疗效监测中的应用， 所述外泌体 lncRNA为lnc‑SNAPC5‑3:4。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述lnc ‑SNAPC5‑3:4的检测引物如SEQ  ID  NO.1‑2所示。 3.外泌体lncRNA在制备RTK抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌疗效监测的试剂或试剂盒中 的应用； 所述外泌体l ncRNA为lnc‑SNAPC5‑3:4。 4.根据权利 要求1‑3任一项所述的应用， 其特征在于， 所述RTK抑制剂为安罗替尼； 所述 晚期非小细胞肺癌包括腺癌、 鳞癌、 大细胞癌中的一种或多种。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 若lnc ‑SNAPC5‑3:4的输出值低 于未接受安 罗替尼治疗的对照组输出值， 说明非小细胞肺癌患者在服用安罗替尼治疗的过程中出现耐 药性。 6.用于检测l nc‑SNAPC5‑3:4的引物， 其特 征在于， 其序列如SEQ  ID NO.1‑2所示。 7.一种试剂 盒， 其特征在于， 用于监测安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的疗 效； 其含有 用于检测l nc‑SNAPC5‑3:4表达水平的试剂。 8.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中包括如SEQ  ID NO.1‑2所 示的检测引物； 还包括用于检测内参基因的上、 下游引物； 优选地， 所述内参基因包括 GAPDH。 9.非诊断目的的监测安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效的方法， 其特征在于， 采用 权利要求6所述的引物或权利要求7 ‑8任一项所述的试剂盒检测lnc ‑SNAPC5‑3:4的表达水 平， 并与未接受安罗替尼治疗的对照组进行比较； 优选地， 所述比较为： 利用内参基因对lnc ‑SNAPC5‑3:4的表达水平进行归一化； 将归一 化后的lnc ‑SNAPC5‑3:4的表达水平值进行逻辑回归处理得到lnc ‑SNAPC5‑3:4输出值； 将 lnc‑SNAPC5‑3:4输出值与未接受安罗替尼治疗的对照组输出值进行比较， 若lnc ‑SNAPC5‑ 3:4输出值低于对照组输出值， 说明非小细胞肺癌患者在服用安罗替尼治疗的过程中出现 耐药性。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 包括： (1)采集待检测对象的体液样本； (2)从步骤(1)的体液样本中提取分离 外泌体； (3)提取外泌体RNA； (4)检测l nc‑SNAPC5‑3:4和内参基因的表达水平并进行差异 表达分析。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959037 A 2外泌体lncRNA在RTK抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌疗效 监测 中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测技术领域， 具体涉及 外泌体lnc RNA在RTK  抑制剂治疗晚期非 小细胞肺癌疗效监测中的应用。 背景技术 [0002]肺癌是全球诊断率最高的癌 症， 也是癌症死亡的主要原因。 在所有肺癌中， 非小细 胞肺癌占80％～85％。 大多数患者在初诊时已为局部晚期或转移性疾病， 只有少数患者可 以通过手术治疗。 一线靶向治疗以及基于铂的第三代抗肿瘤药物显著提高了晚期非小细胞 肺癌患者的生存率。 尽管靶向治疗和免疫检查点阻断等新疗法的出现显著改善了晚期非小 细胞肺癌患者的治疗效果， 但 其预后令人担忧， 5年生存率仅为 19.3％左右。 因此， 新治疗 策 略和药物有效性的研究迫在眉睫， 以提高非小细胞肺癌的治疗疗效。 目前已有研究确定了 安罗替尼作为 三线或三线以上治疗 难治性晚期非小细胞肺癌 患者的疗效和安全性。 [0003]受体酪氨酸激酶(RTK)是最有前途的治疗靶点之一， 可调节多种癌 症的细胞增殖、 生长、 血管生成和转移， 包括非小细胞肺癌、 结直肠癌和乳腺癌等。 RT K家族包括胰岛素 受体 和众多生长因子受体， 包括表皮生长因子受体(EGFR)、 血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、 血管内皮生长因子受体( VEGFR)、 神经生长因子受体(NGFR)和成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)、 干细胞生长因子受体(C ‑kit)等。 近几十年来， 各种RTK抑制剂的开发取得了前所未 有的进展， 其中安罗替尼是一种新型口服RTK抑制剂， 靶向VEGFR2和VEGFR3、  FGFR1‑4、 PDGFR、 C‑kit等， 从而对肿瘤生长和血管生 成发挥抑制作用。 安罗替尼用于治疗≥二线全身 化疗后难治性 晚期非小细胞肺癌患者的三线治疗， 并作为 晚期肺泡软组织 肉瘤、 透明细胞 肉瘤和其它类型的晚期软组织肉瘤患者的二线治疗。 此外， 安罗替尼的多项II/III  期临床 试验已经完成 或正在进行中， 用于各种癌症类型的治疗。 [0004]ALTER 0303试验是一项多中心、 双盲、 III期的随机临床试验， 评估了晚期非小细 胞肺癌患者服用安罗替尼的疗效和 安全性。 与安慰剂组相比， 安罗替尼组的中位无进展生 存期(PFS)显著增加， 但 中位总生存期(OS)对比安慰剂组仅延长3.3个月。 这一试验数据表 明， 安罗替尼在临床治疗的应用中不可避免地出现了耐药 的现象， 患者总生存期并未得到 显著改善， 抗血管生成治疗只起到了短暂的作用。 因此， 安罗替尼耐药问题不容忽视， 在安 罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的过程中找到精准高效的疗效监测标志物至 关重要。 但目前 尚无用于监测 安罗替尼疗效的分子生物标志物来监测非小细胞肺癌患者对该药物的敏感 性， 进而帮助临床医生做出决策、 及时更 换治疗方案以延长患者的总生存期。 [0005]外泌体是含有D NA、 RNA和蛋白质的小膜囊泡， 由细胞不断分泌并传递大分子信息， 如lncRNA等， 使细胞间通讯成为可能。 肿 瘤外泌体参与上皮间质转化、 肿 瘤血管生成、 肿 瘤 转移和放化疗抗性的调节。 外泌体包裹的潜在lncRNA 参与和调节了人类非小细胞肺癌化学 抗性发展过程， 与mRNA相比， 其作为癌症的生物标志 物具有更 大的潜力。 [0006]目前已有文献报道了外泌体lncRNA作为疗效监测生物标志物的潜力。 然而， 目前说　明　书 1/8 页 3 CN 114959037 A 3