(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210706985.4 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 青岛农业大 学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 (72)发明人 褚栋　杨力凤　董兆克　陶云荔　 国栋　 (74)专利代理 机构 山东三邦知识产权代理事务 所(普通合伙) 37308 专利代理师 牛继梅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组、 鉴 别方法及鉴别试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种基于LAMP方法的番茄潜 叶蛾鉴别引物组、 鉴别方法及鉴别试剂盒， 属于 农业害虫鉴别技术领域。 本发明基于LAMP方法的 番茄潜叶蛾鉴别引物组， 是根据SEQID  NO:1所示 核酸序列设计而成； 采用该引物组， 以待测昆虫 的全基因组DNA或部分组织为模板， 进行LAMP反 应； 反应结束后， 检测是否有扩增产物； 若有扩 增， 则待测昆虫为番茄潜叶蛾。 本发明用快速分 子检测加可视化方法鉴别番茄潜叶蛾， 在1小时 内获得检测结果。 免开盖的可视化检测方法可以 有效避免气溶胶污染， 能够准确显色， 显色结果 肉眼可见， 不需要昂贵的仪器设备， 适用于现场、 基层快速鉴别番 茄潜叶蛾 。 权利要求书1页 说明书7页 序列表7页 附图2页 CN 114854881 A 2022.08.05 CN 114854881 A 1.一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组， 其特征在于， 根据SEQ  ID NO:1所示核 酸序列设计而成。 2.根据权利要求1所述基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物 组， 其特征在于， 所述引物 组由核苷酸序列为SEQ  ID NO:2的F3引物、 核苷酸序列为SEQ  ID NO:3的B3引物， 核苷酸序 列为SEQ ID NO:4的FIP引物以及核苷酸序列为SEQ  ID NO:5的BIP引物组成。 3.权利要求2所述基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组在番茄潜叶蛾鉴别中的应 用。 4.一种鉴别番茄潜叶蛾的方法， 其特征在于， 采用权利要求2 的引物组， 以待测昆虫的 全基因组DNA或待测昆虫的部分组织为模板， 进行LAMP反应； 反应结束后， 检测是否有扩增 产物； 若有扩增， 则待测样本为番 茄潜叶蛾。 5.根据权利要求4所述鉴别番茄潜叶蛾的方法， 其特征在于， 所述LAMP反应的条件为： 63℃45min， 80℃灭活10mi n。 6.根据权利要求4所述鉴别番茄潜叶蛾的方法， 其特征在于， 通过向LAMP反应后的体系 中加入核酸染料， 来检测是否有扩增产物。 7.根据权利要求6所述鉴别番茄潜叶蛾的方法， 其特征在于， 所述核酸染料的添加方式 为： 在配制好LAMP反应体系后， 在反应管的内部上端设置一个活动的且不与反应体系接触 的隔膜， 并将核酸 染料滴加在隔膜上， 然后盖上盖子进 行反应， 在反应结束后通过离心使隔 膜上的核酸染料混进反应后的体系中， 通过观察显色结果 来判定是否有扩增产物。 8.根据权利要求7所述鉴别番茄潜叶蛾的方法， 其特征在于， 所述核酸染料为钙黄绿素 或SYBR Green I。 9.一种基于可视化LAMP技术鉴别番茄潜叶蛾的便携试剂盒， 其特征在于， 包含LAMP引 物组， 所述LAMP引物组 由核苷酸序列为SEQ  ID NO:2的F3引物、 核苷酸序列为SEQ  ID NO:3 的B3引物， 核苷酸序列为SEQ  ID NO:4的FIP引物以及核苷酸序列为SEQ  ID NO:5的BIP引物 组成。 10.根据权利要求9所述基于可视化LAMP技术鉴别番茄潜叶蛾的便携试剂盒， 其特征在 于， 还包含核酸染料、 Bst  DNA大片段聚合酶、 10 ×ThermoPol缓冲液、 100mmol/L  MgSO4、 10mmol/L的dNTP混合液、 5mo l/L的Betai ne、 活动隔膜和恒温工具随行杯。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854881 A 2基于LAMP方 法的番茄潜叶蛾鉴别引物组、 鉴别方 法及鉴别试 剂盒 技术领域 [0001]本发明属于农业害虫鉴别技术领域， 具体涉及一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴 别引物组、 鉴别方法及鉴别试剂盒。 背景技术 [0002]番茄潜叶蛾(Tuta  absoluta(Meyrick))属鳞翅目(Lepidoptera)麦蛾科 (Gelechiidae)， 该虫原产于秘鲁安第斯山脉地区， 是全球番茄生产最具入侵性与破坏性的 害虫之一。 该虫寄主范围较广， 已经记录的有9科39种， 可为害蔬菜、 水果、 烟草、 粮食作物、 糖料作物和杂草等多类植物， 主要危害茄科植物， 已在美洲、 欧洲、 非洲和亚洲等80多个国 家和地区发生， 虫害发生后， 会造成严重的番茄减产， 减产率高达80％， 严重情况下减产率 甚至会达到100％。 严重影响蔬菜品质。 由此可见， 做 好番茄潜叶蛾的监测防控， 杜绝番茄潜 叶蛾的危害， 是实现高品质、 高效益蔬菜的重中之重 。 [0003]由于番茄潜叶蛾体型较小， 并且在幼虫阶段就开始进行危害， 常隐蔽发生， 对环 境、 经济等造成了损失， 从而严重影响了蔬菜生产和国际贸易， 被许多国家和地区列为重要 的进境植物检疫性有 害生物。 [0004]长期以来， 番茄潜叶蛾的鉴定主要是基于其形态特征而确定 的， 由于生活环境不 同， 番茄潜叶蛾形态特征会随之发生相应的变化， 给鉴定带来困难。 而且， 在蔬菜的检疫过 程中， 检测到的通常是番茄潜叶蛾幼虫， 通过传统形态学法很难对番茄潜叶蛾幼虫进行准 确鉴定， 这给番 茄潜叶蛾的检疫防控带来困难。 [0005]目前， 虽然有针对番茄潜叶蛾的特异性引物识别技术。 例如， 申请号为 201310058012.5的中国专利申请公开番茄潜叶蛾特异性SS ‑COI引物及快速PCR检测方法和 试剂盒。 该引物只对番茄潜叶蛾具有扩增能力。 但是采用P CR技术， 一般耗时5小时， 耗时长， 过程繁琐受检测材料限制、 对实验仪器及检测人员的技术要求高等缺点， 因此难以满足基 层实验室的检测需求。 发明内容 [0006]针对于现有技术中存在的问题， 本 发明的目的在于提供一种基于可视化LAMP 技术 检测番茄潜叶蛾的方法及应用。 [0007]为了达到上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0008]一种基于LAMP方法的番茄潜叶蛾鉴别引物组， 是根据SEQ  ID NO:1所示核酸序列 设计而成。 [0009]在一个具体的实施例中， 所述引物组由核苷酸序列为SEQ  ID NO:2的F3引物、 核苷 酸序列为SEQ  ID NO:3的B3引物， 核苷酸序列为SEQ  ID NO:4的FIP引物以及核苷酸序列为 SEQ ID NO:5的BIP引物组成。 [0010]上述基于LAMP方法的番 茄潜叶蛾鉴别引物组在番 茄潜叶蛾鉴别中的应用。说　明　书 1/7 页 3 CN 114854881 A 3