(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210729736.7 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 广东省农业科 学院蔬菜研究所 地址 510640 广东省广州市天河区金颖路 66号 (72)发明人 王敏　彭庆务　杨松光　何晓明　 江彪　林毓娥　刘文睿　陈林　 闫晋强　 (74)专利代理 机构 广州广典知识产权代理事务 所(普通合伙) 44365 专利代理师 万志香 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 全雌性型节瓜的KASP分子标记、 引物及筛选 方法 (57)摘要 本发明公开了一种节瓜全雌性型的KASP分 子标记、 引物及筛选方法， 所述KASP分子标记位 于节瓜第8号染色体第14520499处碱基， 该处碱 基发生T到C的突变。 在本发明中， 精确定位了与 节瓜全雌性型紧密连锁的KASP分子 标记， 并通过 该KASP分子标记设计了用于筛选全雌性型节瓜 的引物对， 利用该引物对， 可以在分子层面实现 全雌性型和普通性型节瓜材料的精 准筛选， 提高 节瓜雌性育种的效率， 具有重要的应用价 值。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 115125325 A 2022.09.30 CN 115125325 A 1.一种节瓜全雌性型的KASP分子标记， 其特征在于， 所述KASP分子标记位于节瓜第8号 染色体第1452049 9处碱基， 该处碱基发生T到 C的突变。 2.一种筛选全雌性型节瓜的引物， 其特征在于， 所述引 物包括： 序列如SEQ  ID NO.1所 示的正向引物、 以及序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示的反向引物。 3.根据权利要求2所述的筛选全雌性型节瓜的引物， 其特征在于， 所述反向引物的5'端 连接有荧 光基团FAM或H EX。 4.根据权利要求3所述的筛选全雌性型节瓜的引物， 其特征在于， 所述序列如SEQ  ID  NO.2所示的反向引物的5'端连接有荧光分子HEX， 所述序列如SEQ  ID NO.3所示的反向引物 的5'端连接有荧 光分子FAM 。 5.权利要求1所述的KASP分子标记、 或权利要求2～4任一项所述的引物在制备筛选全 雌性型节瓜的试剂盒中的应用。 6.权利要求1所述的KASP分子标记、 或权利要求2～4任一项所述的引物在节瓜辅助选 择育种中的应用。 7.一种筛选全雌性型节瓜的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求2～4任一 项所述的筛 选全雌性型节瓜的引物。 8.一种筛选全雌性型节瓜的方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤： 以待测节瓜样 品的DNA为模板， 权利要求2～4任一项所述的引物为引物， 进行PCR扩增， 检测位于节瓜第8 号染色体第1452049 9碱基是否发生T到 C的突变。 9.根据权利要求8所述的筛选全雌性型节瓜的方法， 其特征在于， 若待测节瓜样品的基 因型为T:T， 则待测节瓜样品为全雌性型节瓜； 若待测节瓜样品的基因型为C: C， 则待测节瓜 样品为普通性型节瓜； 若待测节瓜样品的基因型为T: C， 则待测节瓜样品为杂合普通性型节 瓜。 10.根据权利要求8所述的筛选全雌性型节瓜的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增程序 为： 95℃预变性10min； 94℃变性15s， 61～55℃退火1min， 退火温度每循环递减0.6℃， 上述 过程10个 循环； 然后94℃变性15s， 57℃延伸1mi n， 30个循环， 最后3 0℃运行1mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125325 A 2全雌性型节瓜的KASP分子标记、 引物及筛选方 法 技术领域 [0001]本发明属于分子标记技术领域， 更具体地， 本发明涉及一种全雌性型节瓜 的KASP 分子标记、 引物及筛 选方法。 背景技术 [0002]节瓜营养丰富， 风味独特， 具有清热、 解暑、 消肿等功效， 是重要的功能保健型蔬 菜， 已成为 我国内销和出口的名优特产 蔬菜。 节瓜富含维生素、 氨基酸、 微量元素和抗氧化 物质， 具有清热消暑和止血消炎的功效， 是一种药食兼用的多功能蔬菜， 已成为华南地区重 要的日常消费蔬菜。 [0003]节瓜以幼嫩果实为主要食用器官， 有连续坐果习性， 提高雌花比例有利于实现早 熟、 高产。 全雌性材料具有第一雌花节率低、 连续开雌花且数目多、 无雄花等特点。 在节瓜、 丝瓜与苦瓜育种 过程中， 利用全雌系作为母本配制的杂种一代可以显著提升早熟性， 增加 单株坐果数和产量。 同时， 在繁制杂种一代种子时， 利用优良全雌系作为母本， 雌雄同株的 自交系作父本， 通过虫媒授粉可以显著 提高繁种效率， 且可避免人工去雄不彻底， 确保杂种 一代制种的纯度。 因此， 全雌性状是影响节瓜产量和杂种一代繁制种的重要性状。 [0004]但是， 目前我国节瓜优异的全雌性型种质资源较为匮乏， 且可以应用到全雌育种 中的分子标记较少， 极大影响了节瓜全雌育种的效率。 广东省农业科学院蔬菜研究所瓜类 研究一室在 全国率先开展了节瓜雌性系材料创制、 强雌性品种的选育以及相关分子遗传研 究。 2020年研究团队申请的 “与节瓜紧密连锁的In del分子标记gyIn del3及其应用 ”专利获 得了国家知识产权局的授权。 但是Indel分子标记仍然需要电泳技术平台， 且对于遗传 多样 性较为匮乏的作物来说， 无法获得较多的I ndel分子标记， 无法精细定位全雌性状。 [0005]目前， 兴起的KASP(Kompet itive Allele‑Specific  PCR)利用通用荧光探针， 可针 对广泛基因组DNA样品， 包括复杂基因组DNA样品， 对目标SNPs或InDels进行精准的双等位 基因分型， 较Indel标记具有操作简单， 便捷， 准确的优点， 可以显著 提高大规模筛选育种材 料的效率。 [0006]若是可以筛选到节瓜全雌基因的KSAP分子标记， 将对节瓜全雌材料的筛选， 具有 重要的意 义。 发明内容 [0007]基于此， 本发明的目的之一在于提供一种节瓜全雌性型的KASP分子标记， 利用该 KASP分子标记， 可以检测节瓜材 料是全雌性型， 还是普通 性型。 [0008]实现上述发明目的 的具体技 术方案包括如下： [0009]一种节瓜全雌性型的KASP分子标记， 所述KASP分子标记位于节瓜第8号染色体第 14520499处碱基， 该处碱基发生T到 C的突变。 [0010]本发明还提供了上述KAS P分子标记在制备筛 选全雌性型节瓜的试剂盒中的应用。 [0011]本发明还提供了上述KSAP分子标记在节瓜辅助选择育种中的应用。说　明　书 1/7 页 3 CN 115125325 A 3