(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210683217.1 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 浙江农林大 学 地址 311300 浙江省杭州市临安市武肃街 666号 (72)发明人 张俊红　徐晓珊　童再康　杨琪　 (74)专利代理 机构 北京智为时代知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11498 专利代理师 王加岭　杨静 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/84(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 1/21(2006.01)A01H 5/06(2018.01) A01H 6/20(2018.01) A01H 6/82(2018.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 光皮桦miR482b- 5p， 其前体 基因和应用 (57)摘要 本发明提供一种光 皮桦miR482b ‑5p， 其前体 基因及其在提高植物低磷胁迫耐受性中的应用。 本发明提供的光皮桦成熟miR482b ‑5p， 序列如 SEQ ID No .2所示。 本发明提供的光皮桦 miR482b ‑5p前体基因的序列优选如SEQ  ID N  o.1所示。 过表达光皮桦miR482b ‑5p前体基因能 够提高拟南芥对低磷胁迫的耐受性。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图3页 CN 115125249 A 2022.09.30 CN 115125249 A 1.一种光皮桦成熟miR482b ‑5p， 序列如SEQ  ID No.2所示。 2.可剪切生成权利要求1所述的光皮桦 成熟miR482b ‑5p的光皮桦miR482b ‑5p的前体基 因。 3.如权利要求2所述的前体 基因， 其特 征在于， (a)由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成， 或 (b)与SEQ  ID No.1所示的核苷酸序列 至少具有70％、 至少具有75％、 至少具有80％、 至 少具有85％、 至少具有90％、 至少具有95％、 至少具有96％、 至少具有97％、 至少具有98％或 至少具有9 9％同源性且经剪切后生成光皮桦miR482b ‑5p的核苷酸序列。 4.含有权利要求2或3所述的前体 基因的重组载体。 5.含有权利要求2或3所述的前体 基因的转基因细胞系。 6.含有权利要求2或3所述的前体 基因的重组菌 。 7.权利要求2或3所述的前体 基因在提高植物低磷胁迫耐受性中的应用。 8.如权利要求7所述的用途， 其特征在于， 将构建的含有权利要求2或3所述的前体基因 的过表达载体转入植物基因 组中， 并在转基因植物中超量表达， 提高植物低磷胁迫耐受性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125249 A 2光皮桦miR482b ‑5p， 其前体基因和应用 技术领域 [0001]本发明属于植物生物技术领域， 涉及光皮桦miR482b ‑5p的前体基因及其在提高植 物低磷胁迫耐受性中的应用。 背景技术 [0002]光皮桦(Betula  luminifera)， 桦木科(Betulaceae)桦木属(Betula)高大落叶乔 木， 为我国特有 珍贵树种， 其因速生、 材质优良成为高级实木家具、 地板的优质用材之一， 近 年已成为南方山区重要 珍贵用材树种。 然而， 现多 数栽培地的可利用磷不 足， 成为限制光皮 桦速生丰产的重要因素。 磷是植物生长发育必需营养元素之一， 与植物的代谢过程密切相 关， 同时也参与影响酶活性调节。 然而土壤中可利用磷低， 且磷酸盐被认为是不可再生资 源， 尤其南方 红壤存在严重缺磷问题。 因此， 提高磷肥利用效率对于提升林木生产力和减少 磷肥施用意 义重大。 [0003]miRNA是一类18～24nt长、 内源非编码小RNA分子， miRNA成熟体进入Ar gonaute蛋 白形成沉默复合体行使对靶基因切割或翻译抑制来调控基因表达。 miR482/2118是一个古 老的超家族， 主要通过调控NBS ‑LRR或PHAS触发phasiRNA级 联放大信号， 在植物抵抗生物胁 迫和生长发育过程发挥重要调控功能。 例如番茄miR482b通过沉默NBS ‑LRR影响植物 ‑病原 体相互作用、 MAPK信号通路等途径在抗病免疫中发挥重要功能。 还有研 究表明miR482参与 植物非生物胁迫调控， 例如大麦miR482b参与低钾胁迫下钙信号调节通路。 然而， 关于 miR482b ‑5p研究较少见报道。 已有研究表明拟南芥类受体蛋白激酶基因Receptor ‑ interacting  serine/threonine ‑protein kinase(RIPK)＝通过磷酸化Respiratory   Burst Oxidase Homologues  D(RBOHD)介导ROS产生参与植物免疫信号。 植物抗氧化防御系 统与逆境胁迫响应密不可分， 如低磷胁迫致植物ROS过量积累影响生长。 光皮桦miR482b ‑5p 的靶基因为RIPK1， 可能参与调控低磷胁迫下的ROS产生， 从而影响低磷胁迫耐受性。 发明内容 [0004]本发明的目的在 于提供了光皮桦miR482b ‑5p， 其前体基因及其在提高低磷胁迫耐 受性中的应用。 [0005]首先， 本发明提供一种光皮桦成熟miR482b ‑5p， 序列如SEQ  ID No.2所示。 [0006]本发明还提供可剪切生成所述的光皮桦成熟miR482b ‑5p的光皮桦miR482b ‑5p的 前体基因。 [0007]其中， 所述的前体 基因： [0008]a)由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成， 或 [0009]b)与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列至少具有70％、 至少具有75％、 至少具有 80％、 至少具有85％、 至少具有90％、 至少具有95％、 至少具有96％、 至少具有97％、 至少具 有98％或至少具有9 9％同源性且经剪切后生成光皮桦miR482b ‑5p的核苷酸序列。 [0010]本发明还提供含有前体 基因的重组载体、 转基因细胞系和重组菌 。说　明　书 1/10 页 3 CN 115125249 A 3