(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210616588.8 (22)申请日 2022.06.02 (71)申请人 昆明理工大 学 地址 650093 云南省昆明市五华区学府路 253号 (72)发明人 王炳辉　黄保洋　夏雪山　冯悦　 (74)专利代理 机构 昆明同聚专利代理有限公司 53214 专利代理师 苏芸芸 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6893(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/01(2006.01) C12R 1/42(2006.01) C12R 1/90(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 中枢神经系统感染性病原体的多重荧光定 量PCR检测引物组合 (57)摘要 本发明公开了一种中枢神经系统感染性病 原体的多重荧光定量PCR检测引物组合， 其包括 检测脑膜炎奈瑟菌、 疱疹病毒6型、 伤寒立克次氏 体、 猿猴空泡病毒40、 伤寒沙门氏菌、 解脲脲原 体、 弓形虫、 BK多瘤病毒的特异性引物和探针； 该 方法具有特异性强、 灵敏度高、 反应快速且应用 范围广的优点， 大幅度提升了检测的速度并节约 成本， 可广泛应用于脑炎脑膜炎等各种中枢神经 系统感染性疾病常见病原体的检测， 提高病原体 的检出率， 对临床诊断中枢神经系统感染性疾病 意义重大。 权利要求书1页 说明书8页 序列表7页 附图15页 CN 114836579 A 2022.08.02 CN 114836579 A 1.一种中枢神经系统感染性病原体的多重荧光定量PCR检测引物 组合， 其特征在于： 包 括检测脑膜炎奈瑟菌、 疱疹病毒6型、 伤寒立克次氏体、 猿猴空泡病毒40、 伤寒沙门氏菌、 解 脲脲原体、 弓形 虫、 BK多瘤病毒的特异性引物和探针； 所述特异性引物为针对脑膜炎奈瑟菌的SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:2、 针对疱疹病毒6 型的SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5、 针对伤寒立克次氏体的SEQ  ID NO:7和SEQ ID NO:8、 针 对猿猴空泡病毒40的SEQ  ID NO:10和SEQ  ID NO:11、 针对伤寒沙门氏菌的SEQ  ID NO:13和 SEQ ID NO:14、 针对解脲脲原体的SEQ  ID NO:16和SEQ  ID NO:17、 针对弓形虫的SEQ  ID  NO:19和SEQ  ID NO:20； 针对BK多瘤病毒的SEQ  ID NO:22和SEQ ID NO:23； 所述探针为针对脑膜炎奈瑟菌的SEQ  ID NO:3、 针对疱疹病毒6型的SEQ  ID NO:6、 针对 伤寒立克次氏体的SEQ  ID NO:9、 针对猿猴空泡病毒 40的SEQ ID NO:12、 针对伤寒沙门氏菌 的SEQ ID NO:15、 针对解脲脲原体的SEQ  ID NO:18、 针对弓形虫的SEQ  ID NO:21； 针对BK多 瘤病毒的SEQ  ID NO:24。 2.根据权利要求1所述的中枢神经系统感染性病原体的多重荧光定量PCR检测引物组 合， 其特征在于： 检测脑膜炎奈瑟菌、 疱疹病毒6型、 伤寒立克次氏体、 猿猴空泡病毒40的特 异性引物和探针同时使用； 检测伤寒沙门氏菌、 解脲脲原体、 弓形虫、 BK多瘤病毒的特异性 引物和探针同时使用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836579 A 2中枢神经系统感 染性病原体的多重荧光定量PCR检测引物 组合 技术领域 [0001]本发明属于病原菌体测技术领域， 具体涉及一种中枢神经系统感染性病原体的多 重荧光定量PCR检测引物组合。 背景技术 [0002]中枢神经系统 （CNS） 感染性疾病是由细 菌、 病毒、 真菌等病原体侵犯CNS的脑膜、 实 质、 血管导致的急性或慢性炎症 （非炎症性） 疾病。 [0003]中枢神经系统感染的途径包括血源性感染、 直接感染和间接感染。 血源性感染是 最常见的感染途径， 它是指病原体先穿过粘膜屏障进入血液再穿透血脑屏障进入中枢神经 系统。 直接感染是指神经外科手术或开放性颅脑外伤导致血脑屏障开放， 当进行开颅手术 的时， 病原体感染的几率会上升， 或是造成颅内邻近组织感染如中耳炎、 额窦炎， 感染后病 原体会蔓延 侵入CNS。 逆行感染是指一些嗜神经病毒比较容易 感染呼吸道、 消化道或皮肤黏 膜, 然后沿神经末梢逆 行感染， 导致中枢神经系统感染性疾病。 确定了CNS感染性疾病常见 的8种病原体有脑膜炎奈瑟菌 （ Neisseria  meningitidis ） 、 疱疹病毒6型 （Human  Herpes  Virus 6， HHV6） 、 伤寒立克次氏体 （ Rickettsia  typhi） 、 猿猴空泡病毒40 （Simian   Vacuolating  Virus SV40）、 伤寒沙门氏菌 （ Bacterium  typhosum ）、 解脲脲原体 （Ureaplasma  urealyticum ）、 弓形虫（ Toxoplasma  Gondii）、 BK多瘤病毒（BK   Polyornaviruses， BKV） 等会导 致严重的后果。 [0004]由于该些病原体感染的途径较广泛， 所以导致的疾病普遍具有较高的发病率和死 亡率， 因此及时发现和治疗对于患者的生存至关重要。 目前临床上常用的检测方法包括培 养法、 镜检法、 免疫学方法等具有一定的局限性， 检测灵敏度低 或检测时间长等。 生理生化 检测必须对新鲜的脑脊液进 行检测， 检测的灵敏度很低， 只能大致判断中枢感染类型， 临床 上一般会将脑脊液涂片 检查和分离培养方法结合使用， 虽然检测成本低， 但灵敏度极差， 很 容易延误病情， 耽误病人的治疗。 免疫 学检测检测容易出现假阳性， 在临床上诊断具有局限 性。 实验室常用的诊断方法包括PCR检测、 基因芯片技术、 二代测序技术和荧光定量PCR检 测。 这些方法中P CR检测检测通量低且容易造成假阳性反应， 二代测序技术与基因芯片技术 所用成本 很高， 不能大规模的应用与临床。 发明内容 [0005]针对现有技术的不足， 本发明提供了一种中枢神经系统感染性病原体的多重荧光 定量PCR检测引物组合， 其包括检测脑膜炎奈瑟菌、 疱疹病毒6型、 伤寒立克次氏体、 猿猴空 泡病毒40、 伤寒 沙门氏菌、 解脲脲原体、 弓形虫、 BK多瘤病毒的特异 性引物和探针； 检测时采 用多重荧光定量PCR方法， 检测中还使用到GAPDH基因的特异引物探针及多重荧光定量PCR 检测的其他常规试剂； 本发明检测引物组合具有检测灵敏度高、 特异性强、 重复性良好， 对 仪器设备要求 不高、 操作简便、 所需时间短等优点， 因此 具有较大的应用价 值。说　明　书 1/8 页 3 CN 114836579 A 3