(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211182732.8 (22)申请日 2022.09.27 (71)申请人 西北农林科技大 学 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌区西农路 西北农林科技大 学 (72)发明人 陈书霞　张婷婷　 (74)专利代理 机构 西安新思维专利商标事务所 有限公司 61 114 专利代理师 韩翎 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与黄瓜叶片黄化突变紧密连锁的InDel3分 子标记及其应用 (57)摘要 本发明涉及黄瓜遗传育种和分子生物学技 术领域， 具体涉及一种 与黄瓜叶片 颜色紧密连锁 的InDel3分子 标记及其应用。 InDel3分子 标记位 于黄瓜Gy14基因组DNA第7号染色体InDel21和 SSR20583标记之间的18.6  kb区间内， 在染色体 上的物理位置在1245674 ‑1226636 bp之间。 利用 该标记对黄瓜叶色黄化突变和杂合位点进行快 速检测， 通过与InDel3分子标记的关联可在种子 时期快速确定黄瓜植株叶色的表型、 进而实现快 速辅助育种以及黄瓜种质选育， 筛选带有隐性基 因的杂合株； 筛选黄瓜具有特异光合作用特性的 种质材料， 为黄瓜辅助育种提供 理论依据和应用 指导。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115466798 A 2022.12.13 CN 115466798 A 1.与黄瓜叶片黄化突变紧密连锁的InDel3分子标记， 其特征在于： 所述InDel3分子标 记位于黄瓜Gy14基因组DNA第7号染色体InDel21和SSR20583标记之间的18.6kb区间内， 在 染色体上的物理位置在1245 674‑1226636bp之间。 2.如权利 要求1所述的与黄瓜叶片黄化突变紧密连锁的InDel3分子标记， 其特征在于： 所述InDel3分子标记是基于黄瓜Gy14基因组DNA第1239217bp处有5bp的碱基插入进行开发 的， 该插入的核苷酸序列为SEQ  ID NO： 1所示的核苷酸序列： CTGAG。 3.根据权利 要求1所述的与黄瓜叶片黄化突变紧密连锁的InDel3l分子标记， 其特征在 于： 所述InDel3分子标记引物包括上游引物InDel3 ‑F： 5’ ‑CAC CAC GCT CAG GAT TCA GAT  G‑3’和下游引物I nDel3‑R： 5’ ‑TCT TAA ATC ATA CCC AGT AGA CCA GG‑3’。 4.如权利 要求1所述的与黄瓜叶片黄化突变紧密连锁的InDel3分子标记， 其特征在于： 所述分子标记用于快速检测黄瓜叶色黄化和杂合 位点中的应用。 5.如权利要求4所述的分子标记用于黄瓜叶色黄化和杂合位点快速检测方法， 其特征 在于： 方法为： 待测黄瓜材料的全基因组DNA提取； 根据InDel3分子标记引物对进行PCR扩增； 具有黄 色叶片表型的单株通过P CR扩增产生526b p单一特征条带； 具有绿色叶片表型的纯合单株产 生531bp的单一特征条带； 正常绿色叶色但该位点为杂合基因型时， PCR扩增获得526bp和 531bp的两条 特征条带。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115466798 A 2与黄瓜叶片黄化 突变紧密连锁的InDel3分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及黄瓜遗传育种和分子生物学技术领域， 具体涉及一种与黄瓜叶片颜色 紧密连锁的I nDel3分子标记及其应用。 背景技术 [0002]叶片是植物光合作用的重要器官， 也是植株形态建成和果实生长的重要基础。 植 物通过光合作用吸收光能和 二氧化碳， 将无机物转化为有机物贮存， 并维持植物生长必须 的养分需求， 以及稳定生态系统平衡的需要。 而叶片作为光合作用的直接载体， 对植物的生 长发育以及能量转换尤为重要。 一般植物叶片因含有大量光合色素而使其呈现绿色， 维持 光合作用的进 行以及能量的转化。 因此， 光合色素是光合作用重要的基础， 在光合作用中起 着十分重要的作用， 是光能吸 收和转换的平台。 [0003]叶片是植物光合作用的重要场所， 而叶绿素含量、 叶绿体结构和叶绿体相关基因 表达与光合作用密切相关。 在一定条件下， 植物发生叶绿体突变， 将改变叶片中叶绿素含 量， 从而产生不同叶色表型。 在科研工作中， 利用叶色突变体进 行基因的挖掘和光合作用机 理的研究， 对明确基因的调控功能和光 合作用的分子 机制都具有重要意 义。 [0004]随着黄瓜基因组测序的完成， 与黄瓜重要农艺性状相关基因的定位报道增加， 这 些研究为重要性状调控基因的挖掘及进行分子育种提供了新的思路。 在自然 条件下或者人 工诱发等条件下， 黄瓜 常常发生各种各样的突变， 其中比较常见的一种突变是叶色突变， 也 是自然界比较普遍的突变现象， 这些突变体是研究植物光合作用机制、 光形态建成、 叶绿素 代谢、 叶绿体结构功能及遗传发育调控机理的重要 材料， 也是分析鉴定基因功能， 了解基因 互作与表达调控的理想材料。 在育种 过程中， 黄瓜叶色突变可作为性状标记在良种繁育和 杂交育种中进 行应用， 在杂种一代的选择中可以极大地提高鉴定效率。 这不仅 操作简便， 程 序简单和结果 直观， 还可以大 大地降低育种成本以及育种周期。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本 发明涉及一种与黄瓜叶片黄化突变紧密连锁的InDel3分子标记及其 应用。 利用该标记对黄瓜叶色黄化突变和杂合位点进行快速检测， 通过与InDel3分子标记 的关联可在种子时期快速确定黄瓜植株叶色的表型、 进而实现快速辅助育种以及黄瓜种质 选育， 筛选带有隐性基因的杂合株； 筛选黄瓜具有 特异光合作用特性的种质材料， 为黄瓜辅 助育种提供理论依据和应用指导。 [0006]为解决现有技术存在的问题， 本发明的技术方案是： 与黄瓜叶片黄化突变紧密连 锁的InDel3分子标记， 其特征在于： 所述InDel3分子标记位于黄瓜Gy14基因组DNA第 7号染 色体InDel21和SSR20583标记之间的18.6kb区间内， 在染色体上的物理位置在1245674 ‑ 1226636bp之间。 [0007]所述InDel3分子标记是基于黄瓜Gy14基因组DNA第1239217bp处有5b p的碱基插入 进行开发的， 该插 入的核苷酸序列为SEQ  ID NO： 1所示的核苷酸序列： CTGAG。说　明　书 1/4 页 3 CN 115466798 A 3