(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210712090.1 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市天河区五山路 483号 (72)发明人 程蛟文　胡开林　崔竣杰　钟建　 (74)专利代理 机构 广东广信君达律师事务所 44329 专利代理师 余胜茂 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与苦瓜全雌性状共分离的分子标记、 引物及 其应用 (57)摘要 本发明属于蔬菜分子育种技术领域， 涉及与 苦瓜全雌性状共分离的分子标记、 引物及其应 用。 本发明开发了1个与苦瓜全雌性状共分离 CAPS分子标记， 提供与苦瓜全雌性状共分离的分 子标记的扩增引物， 可以实现在苦瓜种子或者幼 苗阶段判定苦瓜的全雌性， 可以辅助苦瓜全雌性 状的选择， 提高苦瓜全雌系的培育效率， 最终降 低苦瓜杂交一代制种的成本， 解决了现有技术采 用常规田间转育的方法进行苦瓜全雌系的选育 存在过程繁琐， 耗时费力等 缺点。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图1页 CN 114854901 A 2022.08.05 CN 114854901 A 1.一种与苦瓜全雌性状共分离的分子标记， 其特征在于： 所述分子标记的核苷酸序列 如SEQ ID NO： 1所示。 2.根据权利要求1所述的与苦瓜全雌性状共分离的分子标记， 其特征在于， 在所述分子 标记的核苷酸序列的第265位存在SNP突变C/A， 所述SNP突变位于苦瓜1号染色体21,144, 412位置。 3.一种用于扩增权利要求1所述分子标记的引物对， 其特 征在于， 所述引物对 包括： CAPS_1_144‑正向引物： 5 ’ ‑CCTTTAGGTTATTCACGGGACA‑3’， CAPS_1_144‑反向引物： 5 ’ ‑AACTCTTCACTCCATGTCATGT ‑3’。 4.一种苦瓜全雌性状的鉴定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.提取新鲜苦瓜幼嫩真叶组织的基因 组DNA； S2.以苦瓜苦瓜幼嫩真叶组织的基因组DNA为模板， 使用权利要求3所述的引物对进行 PCR扩增， 并以快速内切酶Hi nP1I对PCR产物进行酶切； S3.利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果条 带， 根据检测结果判断苦瓜全雌性状。 5.根据权利要求4所述的苦瓜全雌性状的鉴定方法， 其特征在于， 若结果为265bp和 188bp的两条带， 则判定为全雌性状； 若结果为452bp的一条带， 或大小分别为452bp、 265bp 和188bp的三条 带， 则判定为雌雄异花同株性状。 6.一种用于鉴定苦瓜全雌性状的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含权利要求3所述 的引物对。 7.权利要求1所述的分子标记或权利要求3所述的引物对在如下(A)～(D)任意一种中 的应用： (A)、 用于鉴定 苦瓜全雌性状； (B)、 用于 选育或辅助选 育苦瓜全雌系； (C)、 制备用于鉴定 苦瓜全雌性状的产品； (D)、 制备用于 选育或辅助选 育苦瓜全雌系的产品。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854901 A 2与苦瓜全雌性状 共分离的分子标记、 引物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及蔬菜分子育种技术领域， 涉及 一种与苦瓜全雌性状共分离的分子标记 开发及应用。 背景技术 [0002]苦瓜(Momordica  charantia  L.)是葫芦科苦瓜属一年生攀援草本植物， 起源于非 洲热带地区， 现广泛分布于非洲和亚洲等地区。 苦瓜属于雌雄同株异 花植物， 在常规杂种一 代种子生产过程中， 需要套袋隔离， 该过程耗时费力。 利用全雌系制种， 不仅可以免除人工 套袋， 减少种子生产成本， 还能够提高杂种一代的纯度， 是苦瓜杂交一代制种的理想途经。 [0003]目前， 苦瓜全雌系的选育仍采用常规田间转育 的方法， 即首先通过人工杂交的方 法将全雌性状导入具有优良性状的材料中， 由于全雌性属于隐性遗传， 每次杂交(回交)后 需自交， 才能分离出具有全雌表型的单株， 整个转育过程程序繁琐、 耗时费力。 通过开发与 苦瓜全雌基因共分离的分子标记， 可以实现在种子或者苗期阶段对苦瓜植株全雌性状进 行 早期鉴别和判定， 将会大 大提高苦瓜全雌系的培 育效率。 发明内容 [0004]为了解决上述现有技术采用常规田间转育的方法进行苦瓜全雌系的选育存在过 程繁琐， 耗时费力等缺点。 本发明的目的一在于提供一种与苦瓜全雌性状共分离的分子标 记， 目的二在于提供扩增所述分子标记的引物对， 目的三在于提供一种苦瓜全雌性状的鉴 定方法， 目的四在于提供一种试剂盒， 目的五在于提供所述分子标记或引物对的应用。 本发 明通过开 发与苦瓜全雌基因共分离的分子标记， 可以实现在种子或者苗期阶段对苦瓜植株 全雌性状进行早期鉴别和判定， 将会大 大提高苦瓜全雌系的培 育效率。 [0005]本发明采用的具体方案如下： 一种与苦瓜全雌性状共分离的分子标记， 所述分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 1所示。 [0006]进一步地， 在所述分子标记的核苷酸序列的第265位存在SNP突变C/A， 所述SNP突 变位于苦瓜1号染色体21,14 4,412位置 。 [0007]本发明提供一种用于扩增上述分子标记的引物对， 所述引物对 包括： CAPS_1_144‑正向引物： 5 ’ ‑CCTTTAGGTTATTCACGGGACA‑3’， CAPS_1_144‑反向引物： 5 ’ ‑AACTCTTCACTCCATGTCATGT ‑3’。 [0008]本发明还提供一种苦瓜全雌性状的鉴定方法， 包括以下步骤： S1.提取新鲜苦瓜幼嫩真叶组织的基因 组DNA； S2.以苦瓜苦瓜幼嫩真 叶组织的基因组DNA为模板， 使用权利要求3所述 的引物对 进行PCR扩增， 并以快速内切酶Hi nP1I对PCR产物进行酶切； S3.利用6％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果条带， 根据检测结果判断苦瓜全雌性 状。说　明　书 1/10 页 3 CN 114854901 A 3