(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210697353.6 (22)申请日 2022.06.20 (71)申请人 兰州大学 地址 730000 甘肃省兰州市城关区天水南 路222号 (72)发明人 王维民　程江博　李发弟　张小雪　 张德印　李晓龙　张煜坤　赵源　 徐丹　李文馨　王江荟　赵利明　 林长春　周步博　 (74)专利代理 机构 北京智为时代知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11498 专利代理师 王加岭　杨静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与绵羊阶段体重相关的分子标记、 其检测方 法及应用 (57)摘要 本发明提供了一种与绵羊阶段体重相关的 分子标记、 其检测方法及应用。 本发明通过对绵 羊GHR基因进行PCR扩增和序列分析， 发现在扩增 片段如SEQ  ID NO.1所示序列的第196位存在一 个A/G多态性位点， 进一步使用KASPar引物对3 75 只湖羊、 31只滩 羊和82只杜泊羊的多态性位点进 行检测和建立最小二乘模型， 对基因型与阶段体 重的性状进行关联分析， 最终确定了本发明扩增 的GHR基因片段可以作为与绵羊阶段体重相关的 分子标记。 本发明通过检测分子标记， 可用于选 留基因为AA纯合型湖羊进入核心 群作为种羊， 以 绵羊的阶段体 重， 有助于提高生产的效率。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 115109856 A 2022.09.27 CN 115109856 A 1.一种与绵羊阶段体重相关的分子标记， 其特征在于， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所 示， 其中第196bp处的R表示A或G， 该突变导 致分子标记的A/G多态性。 2.用于检测权利要求1所述分子标记 的PCR引物对， 其特征在于， 其包括上游引物和下 游引物， 所述上游引物和下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示序列。 3.用于检测权利要求1所述分子标记的KASPar引物对， 其特征在于， 其包括用于检测 AlleleA的引物A1、 用于检测AlleleG的引物A2和通用反向引物， 所述用于检测AlleleA的引 物A1的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 所述用于检测AlleleG的引物A2的核苷酸序列如 SEQ ID NO.5所示， 所述 通用反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示。 4.用于检测权利要求1所述分子标记的检测试剂盒， 其特征在于， 其包含权利要求2 的 PCR引物对或权利要求3所述的KAS Par引物对。 5.一种检测与绵羊阶段体重相关的分子标记的方法， 其包括如下步骤： a)使用权利要求2的PCR引物对或权利要求3所述的KASPar引物对， 或者使用权利要求4 所述的检测试剂盒， 对湖羊基因 组DNA进行扩增； b)对步骤a)获得扩增产物的多态性 位点进行分型鉴定； 其中， 所述分子标记的序列如SEQ  ID NO.1所示， 其第196bp位的R表示A/G突变。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤b)中的分型鉴定方法为直接测序法、 基因芯片法、 荧 光探针法或高分辨 率溶解曲线法。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 利用权利要求3所述的KASPar引物对进行 PCR扩增， 扩增结束后， 再通过检测荧 光信号确定分型 结果。 8.权利要求1所述的分子标记或权利要求2或3所述的引物对， 或权利要求4所述的检测 试剂盒， 或权利要求5 ‑7中任一项所述的方法在绵羊阶段体重相关性状 检测中的应用。 9.权利要求1所述的分子标记或权利要求2或3所述的引物对， 或权利要求4所述的试剂 盒， 或权利要求5 ‑7中任一项所述的方法在绵羊育种中的应用， 其特征在于， 所述育种为培 育高产型绵羊。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109856 A 2与绵羊阶段体重相关的分子标记、 其检测方 法及应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记的技术领域， 具体涉及GHR基因片段作为影响绵羊阶段体重 相关的分子标记、 其检测方法及应用。 背景技术 [0002]种业是畜牧业的上游核心产业， 也是畜牧业的 “芯片”。 育种在畜牧的科技贡献中 所占比例最高， 达40％以上。 而性能测定是育种的基础， 没有性能测定的育种是不切实际 的。 在肉羊生产实践中， 阶段体重反映了绵羊产肉的能力， 因此提高阶段体重对 经济和生产 效率具有重要的意义。 长期以来， 阶段体重(Bo dy weight， BW)作为衡量肉羊生产性能的一 项重要的经济指标， 研 究表明阶段体重属于中等遗传力(0.35～0.46)， 受遗传控制且 能够 通过选择改良(朱波， 李姣， 汪聪勇， 徐凌洋， 陈燕， 高雪， 张路培， 高会江， 李俊雅.我国肉用 西门塔尔牛群体生长发育性状遗传参数估计及其遗传进展[J].畜牧兽医学报， 2020， 51 (08):183 3‑1844.)。 但是有关绵羊阶段体重相关的候选基因报道较少。 [0003]生长激素受体(Growth  hormone receptor， GHR)属于细胞分裂素/造血生成素受 体超家族的成员， 由9个内含子和10个外显子组成。 GHR基因最初在家兔的肝细胞中被发现， 后来在牛、 羊、 小鼠和鸡中被检测到(Ilkbahar,Ilkbahar， Y.N.， et  al.， Expression  and  distribution  of messenger  ribonucleic  acids for growth hormone(GH)receptor   and GH‑binding protein in mice during pregnancy.199 5， 386‑392.)。 它 编码一种特定 的膜蛋白， 并通过影 响生长激素(GH)的作用来影 响身体的生长和发育(Tanaka， M.， et  al.， Expression  of aberrantly  spliced growth hormone receptor  mRNA in the sex‑ linked dwarf chicken， Gifu  20.1995， 218 ‑223.)。 生长激素可以有效通过加快肌细胞的 分化与发育来影响机体肌肉的生成与发育， 进而影响其阶段体重。 阶段体重属于中等遗传 力， 受到基础代谢、 所处环境、 饲料效率、 机体活动、 饲料营养等多种因素的影响。 GHR基因与 绵羊阶段体重是否有关系， 有什么关系并不清楚。 发明内容 [0004]为了克服现有技术的上述缺陷， 本发明提供一种作为与绵羊阶段体重相关的分子 标记、 其检测方法及应用。 本发明的分子标记是从绵羊GHR基因中扩增得到， 其核苷酸序列 如SEQ ID NO.1所示。 通过扩增绵羊GHR基因的DNA序列并测序， 寻找GHR基因的多态 性位点， 分析不同的基因型与绵羊阶段体重相关性， 并建立含多态性位点的检测方法， 并可将该分 子标记应用于高产型优质肉羊新品种的培 育中。 [0005]为实现上述目的， 本发明采用以下的技 术方案为： [0006]一种与绵羊阶段体重相关的分子标记， 该分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1 所示， 其中第196bp位的R表示A或G， 由于上述序列在第196位碱基处有一个A/G突变， 从而导 致了绵羊GHR基因在该位 点的A/G多态性。 [0007]用于检测 上述分子标记的PCR引物对， 优选地， 其包括上游引物和 下游引物， 所述说　明　书 1/5 页 3 CN 115109856 A 3