(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210579997.5 (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 山西农业大 学 地址 030031 山西省太原市小店区龙城大 街81号 (72)发明人 孙迪　蔡春波　杨晓奋　张燕伟　 安家岐　李娇　崔子旭　史明月　 员佳乐　李文霞　杨帅　曹果清　 李步高　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 黄爽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/113(2010.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及 其应用 (57)摘要 本发明提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖 相关的circRNA及其应用。 本发明基于前期转录 组测序数据， 发现circCSDE1能够在猪肌肉组织 中高表达且在不同处理 中差异表达； 并通过NCBI 设计了多条引物进行成环验证， RNA消化酶实验 和正反向引物扩增实验证明了circCSDE1的存 在； 随后通过qPCR技术构建了circCSDE1的组织 表达谱和时序表达谱， 证实其能在肌肉组织上高 表达且表达模式呈先降低后上升的趋势； 进一步 利用qPCR、 EdU染色和CCK ‑8实验验证了 circCSDE1能够促进猪骨骼肌卫星细胞的增殖。 CircCSDE1可作为一种新型的生物标志物来鉴定 猪骨骼肌卫星细胞的增殖情况， 为猪种的遗传改 良提供理论基础。 权利要求书1页 说明书8页 序列表3页 附图5页 CN 114959057 A 2022.08.30 CN 114959057 A 1.与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA， 其特征在于， 所述circRNA对应 的cDNA序 列如SEQ ID NO:1所示。 2.权利要求1所述circRNA作为猪骨骼肌卫星细胞增殖的标志物在制备用于鉴定猪骨 骼肌卫星细胞增殖的检测试剂或试剂盒中的应用。 3.用于检测权利要求1所述circRNA的引物， 其特征在于， 包括如SEQ  ID NO:2所示的上 游引物和如SEQ  ID NO:3所示的下游引物。 4.用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括用于检测 权利要求1所述circRNA 表达水平的试剂。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括SEQ  ID NO:2‑3所示引 物。 6.权利要求1所述circRNA的抑制剂， 其特征在于， 所述抑制剂为SEQ  ID NO:4‑5、 SEQ  ID NO:6‑7或SEQ ID NO:8‑9所示的siRNA， 优选SEQ  ID NO:6‑7所示的siRNA。 7.一种鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖效率的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 检测猪骨 骼肌卫星细胞中权利要求1所述circRNA的相对表达水平， 与对照组相比， 若所述circRNA的 相对表达水平显著降低， 则表明猪骨骼肌卫星细胞增殖效率降低。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 利用SEQ  ID NO:2‑3所示引物检测所述 circRNA的表达水平。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959057 A 2与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子遗传技术领域， 具体地说， 涉及一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相 关的circRNA及其应用。 背景技术 [0002]肌肉是由定向分化的肌肉细胞组成的初级动物组织。 根据肌肉细胞的形状和分 布， 肌肉可以分为骨骼肌、 心肌和平滑肌。 肌肉是具有收缩特性的身体和肢体运动的动力来 源。 此外， 肌肉在哺乳动物的消化、 呼吸、 循环和排泄中也起着关键作用。 成肌是一个复杂的 生理过程， 包括 成肌细胞的增殖和分化以及肌管和肌纤维的形成， 它会持续整个生命周期 。 肌生成是由多种转录因子精确调控的， 如MEF2、 MRF2家族以及肌肉相关的信号通路等。 此 外， 随着研究的深入， 发现一些非编码RNA， 包括lncRNA、 miRNA和circRNA， 在肌生成过程中 是也起到重要的调控作用。 [0003]CircRNA是由mRNA前体环化形成的一种新型环状内源性 RNA。 1976年， circRNA首次 在马铃薯 块茎类病毒中发现。 随后的二十年中由于受分子生物学技术的 限制， circRNA的分 离和验证十分困难。 随着高通量测序技术的发展以及生物信息学的运用， 证实了circRNAs 的广泛存在。 2012年， Salzman等通过转录组测序和实验鉴定， 首次报道了mRNA能环化产生 circRNA。 截止到2013年， 科研工作者已经从RNA ‑Seq数据中鉴定出人类、 小鼠、 线虫中的 circRNA数目分别为1950种、 1903种和724种。 近期的研究表明， circRNA在miRNA调控、 编码 蛋白、 参与转录与翻译及疾病诊断等方面功效显著。 [0004]目前对于circRNA的研究较少， 尤其是其对猪骨骼肌发育的调控机制暂不明确， 因 此， 急需寻找能够调控猪骨骼肌卫星细胞生长发育的circRNAs， 完善调控猪骨骼肌卫星细 胞的非编码RNA领域， 从而为猪种的遗传改良提供理论支撑 。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关的circRNA及其应用。 [0006]为了实现本发明目的， 第一方面， 本发明提供一种与猪骨骼肌卫星细胞增殖相关 的circRNA(circ CSDE1)， 所述circRNA对应的cDNA序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0007]第二方面， 本发明提供所述circRNA作为猪骨骼肌卫星细胞增 殖的标志物在制备 用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的检测试剂或试剂盒中的应用。 [0008]第三方面， 本发明提供一对用于检测所述circRNA的特异性引物， 包括如SEQ  ID  NO:2所示的上游引物和如SEQ  ID NO:3所示的下游引物。 [0009]第四方面， 本发明提供用于鉴定猪骨骼肌卫星细胞增殖的试剂盒， 所述试剂盒包 括用于检测所述circRNA 表达水平的试剂。 [0010]进一步地， 所述试剂盒包括SEQ  ID NO:2‑3所示引物。 [0011]第五方面， 本发明提供所述circRNA的抑制剂， 所述抑制剂为SEQ  ID NO:4‑5、 SEQ  ID NO:6‑7或SEQ ID NO:8‑9所示的siRNA。 其中， SEQ  ID NO:6‑7所示siRNA的干扰效率最说　明　书 1/8 页 3 CN 114959057 A 3