(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210670353.7 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 兰州大学 地址 730000 甘肃省兰州市城关区天水南 路222号 (72)发明人 王维民　李发弟　张小雪　赵利明　 张德印　李晓龙　赵源　张煜坤　 许丹　程江博　王江荟　李文馨　 林长春　 (74)专利代理 机构 北京智为时代知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11498 专利代理师 王加岭　杨静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与湖羊生长性状相关的分子标记、 其检测方 法及应用 (57)摘要 本发明提供了一种与湖羊生长性状相关的 分子标记、 其检测方法及应用。 本发明通过对湖 羊AHSG基因进行PCR扩增和序列分析， 发现在扩 增片段的第2 34位存在一个T/C多态性位点， 进 一 步使用KASPar引物对1481只湖羊的多态性位点 进行检测和建立最小二乘模型， 对基因型与生长 性状进行关联分析， 最终确定了本发明扩增的 AHSG基因片段可以作为与湖羊平均日增重和饲 料转化率相关的分子标记。 本发 明通过检测分子 标记， 可用于选留基因为CC 纯合型湖羊进入核心 群作为种羊， 以改善湖羊的生长性状， 有助于增 加经济效益。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 115044682 A 2022.09.13 CN 115044682 A 1.一种与湖羊生长性状相关的分子标记， 其特征在于， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所 示， 其中第234bp处的Y表示T或C， 该突变导 致分子标记的T/ C多态性。 2.一种检测权利要求1所述的分子标记的PCR引物对， 其特征在于， 其包括正向引物F和 反向引物R， 所述正向引物F和反向引物R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示 序列。 3.一种检测权利要求1所述的分子标记的KASPar引物对， 其特征在于， 其包括正向引物 1、 正向引物2和反向引物C， 所述正向引物1的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 所述正向引 物2如SEQ ID NO.5所示， 所述反向引物C如SEQ  ID NO.6所示。 4.一种检测权利要求1所述的分子标记的试剂 盒， 其特征在于， 其包含权利要求2的PCR 引物对或权利要求3所述的KAS Par引物对。 5.一种检测权利要求1所述的分子标记的方法， 其包括如下步骤： a)使用权利要求2的PCR引物对或权利要求3所述的KASPar引物对， 或者使用权利要求4 所述的试剂盒， 对湖羊基因 组DNA进行扩增； b)对步骤a)获得扩增产物的多态性 位点进行分型鉴定 。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤b)中的分型鉴定方法为测序法、 荧光 探针法、 基因芯片法或高分辨 率溶解曲线法。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 利用权利要求3所述的KASPar引物对进行 PCR扩增， 扩增结束后， 再通过检测荧 光信号确定分型 结果。 8.权利要求1所述的分子标记或权利要求2或3所述的引物对， 或权利要求4所述的试剂 盒， 或权利要求5 ‑7任一项所述的方法在湖羊生长性状 检测中的应用。 9.权利要求1所述的分子标记或权利要求2或3所述的引物对， 或权利要求4所述的试剂 盒， 或权利要求5 ‑7任一项所述的方法在湖羊育种中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 其育种目的是为挑选出快速生长节粮型 湖羊。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044682 A 2与湖羊生长性状相关的分子标记、 其检测方 法及应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记的技术领域， 具体涉及AHSG基因片段作为影响湖羊生长性状 的分子标记、 其检测方法及应用。 背景技术 [0002]湖羊α2‑HS糖蛋白基因(AHSG)位于1号染色体上， 属于3型半胱氨酸蛋白酶抑制剂 家族蛋白， A HSG是胰岛素刺激的IR ‑TK的天然抑制剂(Auberger  et al.， 1989； Srinivas  et  al.， 1993)。 AHSG基因参与动物体脂和胰岛素敏感性的调节， 被认为是影 响体脂含量和代谢 的候选基因(Lavebratt&C.， 2005)。 而在人类中， AHSG是一种主要在肝脏合成的血浆蛋白 (Yang， Chen， Bergeron， Cupples， &Friedrichs， 1992)。 此外， 有报道称AHS G基因的Ser单倍 型与男性的瘦弱有关(C.Lavebratt， Wahlqvist， Nor  Df Ors， Hoffstedt， &Arner， 2005)。 Lavebratt等人(Lavebratt&C.,2 005)研究表明， AHSG基因多态性与皮下脂肪细胞的脂解有 关。 敲除AHSG基因的小鼠体内脂肪含量较低， 并且对体重增加有抵抗力， 这表明AHSG在肥胖 的发展中起着重要作用(Mathews  et al.， 2002)。 然而， 截至目前， AHSG基因在湖羊上的研 究较少， 具体对湖羊的作用也 不清楚。 发明内容 [0003]为了克服现有技术的缺陷， 本发明提供一种作为与湖羊生长性状相关的分子标 记、 其检测方法及应用。 本发明的分子标记是从湖羊AHSG基因中扩增得到， 其具体核苷 酸序 列如SEQ ID NO.1所示。 通过扩增湖羊AHSG基因的DNA序列并测序， 寻找AHSG基因的多态性 位点， 分析不同的基因型与湖羊生长性状相关性， 并建立含多态性位点的分子标记的检测 方法， 并可将该分子标记应用于新型优质肉羊新品种的培 育中。 [0004]为实现上述目的， 本发明采用以下的技 术方案为： [0005]一种与湖羊生长性状相关的分子标记， 该分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1 所示， 其中第234bp位的Y表示T或C， 由于上述序列在第234位碱基处有一个T/C突变， 从而导 致了湖羊AHSG基因在该位 点的T/C多态性。 [0006]一种检测上述分子标记的引物对， 优选地， 其包括正向引物F和反向引物R， 所述正 向引物F和反向引物R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示序列。 [0007]一种检测上述分子标记的KASPar引物对， 其包括正向引物1、 正向引物2和反向引 物C， 所述正向引物1的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 所述正向引物2如SEQ  ID NO.5所 示， 所述反向引物C如SEQ  ID NO.6所示。 [0008]一种检测上述分子标记的试剂盒， 所述试剂盒中包含了检测上述分子标记的PCR 引物对或KAS Par引物对。 [0009]一种检测与湖羊生长性状相关的分子标记的方法， 所述分子标记的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1所示， 其中第234bp位的Y表示T或C， 所述方法包括利用上述的引物对或试剂盒 对湖羊的基因 组DNA进行检测， 具体 检测方法包括如下步骤：说　明　书 1/5 页 3 CN 115044682 A 3