(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210679461.0 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 首都医科 大学附属北京朝阳医院 地址 100020 北京市朝阳区工 体南路8号首 都医科大学附属北京朝阳医院 (72)发明人 李锋　王凯歌　曹嘉晨　陶林　 张莹　贾兴元　宋凌勰　文豪　 (74)专利代理 机构 北京八月瓜知识产权代理有 限公司 1 1543 专利代理师 袁晓雨 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 上皮样血管内皮瘤分子标志物及其检测试 剂盒 (57)摘要 本发明涉及生物医学检测技术领域， 尤其是 涉及一种上皮样血管内皮瘤的分子标志物 PDGFRA‑USP46融合基因及试剂盒， 分子 标志物为 PDGFRA‑USP46融合基因， 其核苷酸序列如SEQ  ID  No.1所示。 该融合基因是由位于染色体4q12上的 PDGFRA基因Exon  16末端与位于4q12上 的USP46 基因Exon  2前端融合形成， 属于inversion类型 中的splice ‑site融合位点。 本发明基于一步法 qRT‑PCR技术检测上皮样血管内皮瘤的试剂盒， 可实现对石蜡包 埋组织中PDGF RA‑USP46 mRNA的 绝对定量检测， 灵敏度和特异性较高， 可操作性 及重复性强。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图3页 CN 114774554 A 2022.07.22 CN 114774554 A 1.一种上皮样血管内皮瘤的分子标志物， 其特征在于， 所述分子标志物为PDGFRA ‑ USP46融合基因， 所述P DGFRA‑USP46融合基因的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 2.根据权利要求1所述的上皮样血管内皮瘤的分子标志物， 其特征在于， 所述PDGFRA ‑ USP46融合基因由位于染色体4q12上的PDGFRA 基因Exon  16末端与位于4q12上的USP46基因 Exon 2前端融合形成。 3.根据权利要求1所述的上皮样血管内皮瘤的分子标志物， 其特征在于， 所述PDGFRA ‑ USP46融合基因的融合 位点分别为P DGFRA‑chr4和USP46‑chr4。 4.一种检测上皮样血管内皮瘤的检测试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1 ‑3任一项所 述PDGFRA‑USP46融合基因的试剂。 5.根据权利要求4所述的检测上皮样血管内皮瘤的检测试剂 盒， 其特征在于， 还包括所 述PDGFRA‑USP46融合基因的引物组合物。 6.根据权利要求5所述的检测上皮样血管内皮瘤的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述引物 组合物包括正向引物和反向引物， 所述正向引物的序列如SEQ  ID No.2所示， 所述反向引物 的序列如SEQ  ID No.3所示。 7.根据权利要求4所述的检测上皮样血管内皮瘤的检测试剂 盒， 其特征在于， 还包括所 述PDGFRA‑USP46融合基因的探针， 所述探针的序列如SEQ  ID No.4所示。 8.根据权利要求4所述的检测上皮样血管内皮瘤的检测试剂 盒， 其特征在于， 还包括阳 性定量参考品， 所述阳性定量参考品为含有PDGFRA ‑USP46融合基因接合位点片段的PESI ‑T 质粒。 9.根据权利要求4所述的检测上皮样血管内皮瘤的检测试剂 盒， 其特征在于， 还包括阴 性对照， 所述阴性对照为融合基因PDGFRA ‑USP46呈阴性的软组织血管纤维瘤石蜡包埋组 织。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774554 A 2上皮样血 管内皮瘤分子标志物及其检测试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医学检测技术领域， 尤其是涉及 一种上皮样 血管内皮瘤的分子标 志物PDGFRA‑USP46融合基因及其 一步法qRT‑PCR检测试剂盒。 背景技术 [0002]上皮样血管内皮瘤 （Epithelioi d Hemangioen dothelioma， EHE） 是一种少见的恶 性血管源性肿瘤， 1982年由  Weiss和 Enzinger首先报道及描述一组发生于周围软组织内 的血管肿瘤。 2020年WHO发表的肉瘤分型认为EHE分为两种， 一种是常见的经典的基因t(1;   3)(p36.3;  q25)易位形成了WWTR1 ‑CAMTA1融合基因， 另一种是不常见的YAP1 ‑TFE3融合基 因的形成。 迄今国内外有关EHE的文献报道约100例， 对其临床病理和分子遗传学特征尚缺 少足够的认识。 约90%的EHE伴有WWTR1 ‑CAMTA1融合基因， 典型的病理表现为黏液透明间质 内的上皮样内皮细胞巢和条索组成， 缺乏血管形成； 一小部 分(10%)的EHE具有独特的形态， 包括明显的血管形成， 内皮细胞内衬有丰富的嗜酸性细胞质， 并有YAP1 ‑TFE3融合。 EHE肿瘤 细胞常表达血管相关标记物CD31、 CD34、 ERG、 FLI ‑1、 FⅧ等， CAMTA1融合的肿瘤中CAMTA1 (+)， YAP1 ‑TFE3融合的肿瘤中TFE 3核(+)。 [0003]近年来， 分子遗传学研究发现90%以上的EHE具有可重复的染色体易位， 形成 WWTR1‑CAMTA1融合基因。 2013年Cristina  R等在WWTR1 ‑CAMTA1融合阴性的EHE子集中， 检测 出YAP1‑TFE3基因融合目前， 文 献已报道的EHE中存在的染色体易位及其融合基因见表1。 除 WWTR1‑CAMTA1与YAP1 ‑TFE3外， Suurmeijer  AJH等人2020年在6例病例中检测到不同的 WWTR1基因融合， 包括WWTR1 ‑MAML2及WWTR1 ‑ACTL6A， 其中4例位于心 脏。 宋等人2 020年在EHE 中检测到低丰度的PTPRM ‑CCDC120融合。 运用RT ‑PCR、 FISH或二代测序等手段对这些染色体 易位或融合基因进行检测， 有助于 EHE的诊断、 分型和鉴别诊断。 [0004]表1.目前文献报道上皮样血 管内皮瘤存在的染色体易 位及其融合基因 近期， 申请者运用转录组测序、 RT ‑PCR和FISH技术， 在1例人上皮样血管内皮瘤石 蜡包埋组织中发现和验证了一个新的融合基因PDGFRA ‑USP46， 它是由位于染色体4q12上的 PDGFRA基因Exon  16末端与位于4q12上的USP46基因Exon  2前端融合形成， 属于inversion 类型中的splice ‑site融合位点。 目前， 国内外尚未见PDGFRA ‑USP46融合基因在上皮样血管 内皮瘤或其它肿瘤的研究报道。说　明　书 1/9 页 3 CN 114774554 A 3