(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210595862.8 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 河南农业大 学 地址 450002 河南省郑州市金 水区文化路 95号 (72)发明人 冯建灿　连晓东　高帆　谭彬　 郑先波　王小贝　张海朋　程钧　 王伟　张郎郎　叶霞　李继东　 (74)专利代理 机构 北京华际知识产权代理有限 公司 11676 专利代理师 袁瑞红 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定桃花型性状的dCAPs 分子标记及其应用， 所述花型包括铃型、 蔷薇型， 本发明通过在突变位点附近引入错配碱基而衍 生出dCAPs标记， 该标记具有共显性、 位点特异、 操作简单和成本低等优点， 在品种分类和分子标 记辅助育种中得到了广泛的应用。 开发的dCAPs 标记， 在突变碱基处通过引入错配碱基G， 获得 SalI‑HF限制性内切酶位点， 可对自然群体和杂 交群体不同花型资源进行准确鉴定， 准确率 100％。 通过开发的与花型性状相关的dCAPs标 记， 在表型与基因型验证中一致， 可以作为一个 分子标记， 用于杂种后代分子标记辅助早期选 择， 对初步筛选不同花型桃种质资源 具有重要的 科学意义和经济价 值。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图2页 CN 115141894 A 2022.10.04 CN 115141894 A 1.一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记， 其特征在于， 扩增所述分子标记的引物对的 上游引物序列如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述花型包括铃型 和蔷薇型。 2.一种如权利要求1所述的dCAPs分子标记在鉴定或辅助鉴定桃花铃型/蔷薇型性状 中 的应用。 3.一种如权利要求1所述的dCAPs分子标记在桃花铃型/蔷薇型性状分子标记辅助选择 育种方面的应用。 4.一种试剂盒， 其特 征在于， 包 含权利要求1中所述的分子标记的引物对。 5.一种如权利要求 4所述的试剂盒在辅助选择育种方面的应用。 6.一种鉴定桃花型性状的方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： (1)提取待测桃基因 组DNA； (2)以步骤(1)中所提取基因组DNA为模板， 利用权利 要求1所述分子标记的引物对进行 PCR扩增； (3)对步骤(2)中的扩增产物进行酶切处 理， 之后进行电泳检测； (4)根据步骤(3)的电泳条 带结果进行判定， 具体标准 为： 如果酶切产物为长度308bp的特征条带， 该待测桃为蔷薇型， 如果酶切扩增产物为 282bp的特征条带， 该待测桃为纯合铃型， 如果酶切产物为两条长度 分别为308bp、 282bp的 特征条带， 该待测桃为杂合铃型。 7.用于检测dCAPs分子标记是否存在的试剂在桃花型基因定位中的应用， 其特征在于， 扩增所述标记的引物对的上游引物序列如SEQ.ID.NO.1所示， 下游引物序列如SEQ.ID.NO.2 所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141894 A 2一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记及其 应用。 背景技术 [0002]桃(Prunus  persica)属于蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus)， 不仅果实营养丰富， 还具有重要的观赏价值。 桃花型分为铃形(Non ‑showy)和蔷薇形(Showy)， 受一对等位基因 SH/sh控制， 铃形(SH)对蔷薇形(sh)为显性。 位于Chr8上的PpB3 ‑1基因是花型的候选基因， 参与花瓣发育， 促进花 瓣增大， Pp B3‑1启动子区域的SNP与桃的花型性状高度相关。 [0003]马瑞娟等对507个栽培桃资源花型进行调查分析， 发现铃型花资源79个， 占 15.6％， 蔷薇型花资源428个， 占比84.4％， 说明栽培桃品种以蔷薇型花为主。  Chaparro等 通过9个F2分离群体对桃花 型性状的遗传规律进行 分析， F2后代中铃型花与蔷薇型花的分离 比为3∶ 1， 符合孟德尔遗传规律， 为质量性状。 Fan等将该性状作为一个形态学标记锁定在桃 第8号连锁 群上， 位于标记CPPT006与  PacC13之间。 Micheletti等对1580份桃种质资源进行 GWAS分析， 发现位于第  8号连锁群上有18个SNP标记与花型性状紧密相关， 范围为4.3Mb。 随 后Cao 等利用GWAS分析发现位于第8号连锁群13,740,117  bp处存在一个与花型性状关联 度较高的SNP位点。 本团队对 ‘黄水蜜’(sh)和‘中油桃14号 ’(SH)F1杂交群体后代进行GWAS 分析， 发现位于PpB3 ‑1基因启动子区域的一个SNP关联度最高， 并通过测序发现该SNP位点 与花型性状共分离， 且  PpB3‑1(Pp08G015510)基因在不同花型的花瓣中差异表达， 将PpB3 ‑ 1基因确定为桃花型性状候选基因。 [0004]目前， 在公开号为CN  107893125  A的中国发明专利中， 公开了一种用于鉴定桃花 铃型/蔷薇型性状的单核苷酸多态性标记位点， 利用SNP分子标记将桃花铃型/蔷薇型性状 进行区分， 虽然 区分度能够平均达到95.99％， 但是从公开的内容来看， 对有些品种的预测 准确率为90％， 也就是说有可能预测失败， 这样就对于一些难以区分的品种进行细分存在 一定的问题。 同时， CN  107893125  A的中国发明专利中需要进行测序， 且成本较高， 本专利 采用的是dCAPs标记， P CR产物经过酶切 后， 利用聚丙烯 安凝胶电泳就可以进 行检测， 成本较 低。 发明内容 [0005]本发明的目的在 于提供一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记， 该标记鉴定铃型/ 蔷薇型的准确率 为100％。 [0006]为实现上述目的， 本发明的技 术方案概 述如下： [0007]一种鉴定桃花型性状的dCAPs分子标记， 其特征在于， 扩增所述分子标记的引物对 的上游引物序列如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO.2 所示， 所述花型包括铃 型、 蔷薇型。 [0008]上述dCAPs分子标记在鉴定或辅助鉴定桃花铃型/蔷薇型性状以及辅助选择育种说　明　书 1/7 页 3 CN 115141894 A 3