(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210808818.0 (22)申请日 2022.07.11 (71)申请人 常州市中 医医院 地址 213000 江苏省常州市和平北路25号 (72)发明人 颜晓静　王地均　蔡佳丽　廉源沛　 尹春燕　刘楠　黄玮　刘产明　 (74)专利代理 机构 天津市尚仪知识产权代理事 务所(普通 合伙) 12217 专利代理师 孙乔乔 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别猪心血和猪血的引物、 试剂盒和方 法 (57)摘要 本发明公开了一种鉴别猪心血和猪血的引 物、 试剂盒和方法。 上游引物序列如SEQIDN O.1所 示， 下游引物序列如SEQIDN O.2所示。 所述试剂盒 包括上述引物以及PCRMix、 DNA模板、 ddH2O。 所述 方法包括以下步骤： 提取不同样本的DNA； 配置 PCR体系进行PCR扩增： PCR反应条件为： 94℃预变 性15min； 94℃， 30s； 53℃， 30s； 72℃， 1min； 循环 次数35次； 72℃， 延伸5min； 采用琼脂糖凝胶电泳 对PCR产物进行检测。 本发明通过控制PCR扩增不 同阶段条件， 达到在低引物浓度下鉴别猪心血和 猪血的方法， 准确率高， 专属性强， 使用范围广。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 115125311 A 2022.09.30 CN 115125311 A 1.一种鉴别猪心血和猪血的引物， 其特征在于， 包括上游引物和下游引物， 上游引物序 列如SEQ ID NO.1所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO.2所示。 2.一种鉴别猪心血和猪血的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1所述引物。 3.根据权利要求2所述的一种鉴别猪心血和猪血的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还 包括PCR Mix、 DNA模板、 d dH2O。 4.一种鉴别猪心血和猪血的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.提取不同样本的DNA； S2.配置PCR体系进行PCR扩增： 将权利要求1所述引物与PCR  Mix、 DNA模板和ddH2O混合， 配置得到PCR反应 体系； PCR反应条件为： 92‑95℃预变性12 ‑17min； 循环次数3 0‑40次 60‑75℃， 延伸3 ‑6min； S3.采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测。 5.根据权利要求4所述的一种鉴别猪心血和猪血的方法， 其特征在于， PCR反应体系的 总体积为2 0 μL， 包括2 ×SparkTaq  PCR Master Mix 12.5 μL、 上下游引物各 1 μL、 DNA模板2.5 μL、 ddH2O 3 μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125311 A 2一种鉴别猪心血和猪血的引物、 试剂盒和方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 特别涉及一种鉴别猪心血和猪血的引 物、 试剂盒和方 法。 背景技术 [0002]猪心血是孟河医派特色炮制辅料， 其彰显着孟河医派特有的学术思想、 独特的炮 制技术， 历代医家常用其和丸或炮制中药作养心 安神药之向导， 治疗心神不宁， 心悸怔忡 及 痰迷心窍等症。 由于猪心血的取材应用及其不便， 1960年第1版 《浙江省炮制规范》 中记载的 是猪血拌丹参品种， 以期寻 求相同来源的猪血代替猪心血。 [0003]猪心血和猪血在加工成药材过程中， 已经失去形态鉴别特征， 存在严重的掺伪现 象。 而且传统的性状和理化鉴别 分析方法无法有效地判别这些性质相似， 但来源不同的血 液样品， 缺乏准确、 稳定且更为专属的鉴定方法， 因此迫切需要建立一种快捷而简便的猪心 血和猪血真伪鉴别方法。 发明内容 [0004]本发明为了解决上述技术问题， 提供一种鉴别猪心血和猪血的引 物、 试剂盒和方 法。 [0005]本发明是采用以下技 术方案得以实现的。 [0006]一种鉴别猪心血和猪血的引物， 包括上游引物和下游引物， 上游引物序列如SEQ   ID NO.1所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO.2所示。 [0007]一种鉴别猪心血和猪血的试剂盒， 包括上述引物。 [0008]进一步的， 所述试剂盒还 包括PCR Mix、 DNA模板、 d dH2O。 [0009]一种鉴别猪心血和猪血的方法， 包括以下步骤： [0010]S1.提取不同样本的DNA； [0011]S2.配置PCR体系进行PCR扩增： 将上述引物与PCRMix、 DNA模板和ddH2O混合， 配置 得到PCR反应 体系； PCR反应条件为： [0012] [0013]S3.采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测。 [0014]进一步的， P CR反应体系的总体积为20 μL， 包括2 ×SparkTaq  PCR Master Mix12.5 μL、 上下游引物各1 μL、 DNA模板2.5 μL、 d dH2O 3 μL。 [0015]本申请具有以下有益效果。说　明　书 1/4 页 3 CN 115125311 A 3