(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210584289.0 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 济宁医学院附属医院 地址 272100 山东省济宁市任城区古槐路 89号 (72)发明人 靳峰　刘吉兰　王孟杰　张斌　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 吴波 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种诊断烟雾病的分子标志物及其引物对、 试剂盒与应用 (57)摘要 本发明提供了一种诊断烟雾病的分子标志 物， 所述分子标志物为外周血外泌体内miR ‑ 151a‑3p， 属于医学检测技术领域， 本发明选 择外 泌体内miR ‑151a‑3p作为烟雾病新型血液分子标 志物具有如下优点： 1)烟雾病 患者外周血中外泌 体的数量显著高于健康人， 且外泌体不含有血液 中的高丰度蛋白， 对检测干扰小， 具有更高的敏 感性。 2)外泌体以脂质双分子层结构包裹 miRNAs， 使外泌体转运的miRNAs免于RNA酶的降 解， 提高外泌体在血液中的稳定性。 3)血液标本 易获取， 易于检测和标准化试剂盒生产。 4)本发 明外周血外泌体内miR ‑151a‑3p在诊断烟雾病时 特异性强、 灵敏度高。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114959011 A 2022.08.30 CN 114959011 A 1.一种诊断烟雾病的分子标志物， 其特征在于， 所述分子标志物为外周血外泌体内 miR‑151a‑3p， 所述的miR ‑151a‑3p的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.根据权利要求1所述分子标志物的引物对， 其特征在于， 所述引物对为扩增miR ‑ 151a‑3p的上游引物如SEQ  ID NO:2所示和扩增miR ‑151a‑3p的下游引物如SEQ  ID NO:3所 示。 3.根据权利要求1所述的分子标志物或权利要求2所述的引物对在制备诊断烟雾病产 品中的应用。 4.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述产品包括试剂盒、 试剂、 芯片或试纸 条。 5.根据权利 要求3或4所述应用， 其特征在于， 当外周血外泌体内miR ‑151a‑3p相对表达 含量小于1.81时， 表明未患烟雾病， 当外周血外泌体内miR ‑151a‑3p相对表达含量大于或等 于1.81时， 表明患有烟雾病。 6.一种用于诊断烟雾病的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求2所述引物对。 7.根据权利要求5所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括外周血外泌体提取试 剂、 反转录试剂、 定量PCR试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959011 A 2一种诊断烟雾病的分子标志物及其引物对、 试剂盒与应用 技术领域 [0001]本发明涉及医学检测技术领域， 具体涉及 一种诊断烟雾病的分子标志物及其引物 对、 试剂盒与应用。 背景技术 [0002]烟雾病是一种病因不明的、 以双侧颈内动脉末端及大脑前动脉、 大脑中动脉起始 部慢性进行性狭窄或闭塞为特征， 并继发颅底异常血管网形成的一种脑血管疾病， 由于这 种颅底异常血管网在脑血管造影图像上形似 “烟雾”， 故称为“烟雾病”。 烟雾病发病隐匿， 早 期症状以短暂性脑 缺血发作为主， 后 期以脑梗死或脑出血为主， 致残率及致死率较高， 目前 对该病尚无早期的筛查手段， 因此， 明确病因， 早期诊断尤为重要。 [0003]脑血管造影被认为是目前诊断烟雾病的金标准， 但其成本高昂且具有创伤性， 难 以满足临床早期 筛查需要。 因此， 开 发一种特异 性强、 灵敏度高的诊断烟雾病的分子标志物 对于烟雾病的治疗和早期发现具有重要意 义。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种灵敏度高、 特异性强的诊断烟雾病的分子标志物及其 引物对、 试剂盒与应用。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种诊断烟雾病的分子标志物， 所述分子标志物为外周血外泌体内 miR‑151a‑3p， 所述的miR ‑151a‑3p的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0007]本发明还提供了上述分子标志物的引物对， 所述分子标志物的引物对为扩增miR ‑ 151a‑3p的上游引物如SEQ  ID NO:2所示和扩增miR ‑151a‑3p的下游引物如SEQ  ID NO:3所 示。 [0008]本发明还提供了上述分子标志物或上述的引物对在制备诊断烟雾病产品中的应 用。 [0009]优选地， 所述产品包括试剂盒、 试剂、 芯片或试纸条。 [0010]优选地， 当外周血外泌体内miR ‑151a‑3p相对表达含量小于1.81 时， 表明未患烟雾 病， 当外周血外泌体内miR ‑151a‑3p表达含量大于或等于1.81时， 表明患有烟雾病。 [0011]本发明还提供了一种用于诊断烟雾病的试剂盒， 包括上述引物对。 [0012]优选地， 所述试剂盒还 包括外周血外泌体提取 试剂、 反转录试剂、 定量PCR试剂。 [0013]与现有技 术相比， 本发明的有益效果如下： [0014]本发明提供了一种诊断烟雾病的分子标志物， 所述分子标志物为外周血外泌体内 miR‑151a‑3p， 本发明选择外泌体内miR ‑151a‑3p作为烟雾病新型血液分子标志物具有如下 优点： 1)烟雾病患者外周血中外泌体的数量显著高于健康人， 且外泌体不含有血液中的高 丰度蛋白， 对检测干扰小， 具有更高的敏感性。 2)外泌体以脂质双分子层结构包裹miRNAs， 使外泌体转运的miRNAs免于RNA酶的降解， 提高外泌体在血液中的稳定性。 3)血液标本易获说　明　书 1/6 页 3 CN 114959011 A 3