(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210710398.2 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 山西医科 大学 地址 030001 山西省太原市新建南路5 6号 (72)发明人 杨正琰　徐得凯　李佳颖　张雨露　 卫国华　蔡江琦　彭众　周煜　 林志隆　赵菡雅　 (74)专利代理 机构 太原华弈知识产权代理事务 所 14108 专利代理师 马秦锁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 40/00(2019.01)G16B 50/00(2019.01) (54)发明名称 一种结直肠癌相关基因筛查试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种结直肠癌相关基因筛查 试剂盒， 包括用于筛查PMEPA1、 SULF1、 MAD2L1、 TRIP13基因拷贝数变异的核酸扩增试剂， 通过本 发明得到的扩增结果不易出现假阳性， 有效地提 高了样本的检测稳定性， 同时省去了基因探针成 本， 可以直接判断上述与结直肠癌相关的基因表 达是否有异。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图20页 CN 114891890 A 2022.08.12 CN 114891890 A 1.一种结直肠癌相关基因筛查试剂盒， 包括用于扩增结直肠癌相关基因的核酸扩增试 剂， 其中所述试剂包括SEQ  ID NO.1~8所示4对引物， 用于扩增PMEPA1、 SULF1、 MAD2L1和 TRIP13四个 基因。 2.根据权利要求1所述的结直肠癌相 关基因筛查试剂盒， 其中所述试剂还包括SEQ  ID  NO.9所示的上游引物和SEQ  ID NO.10所示的下游引物， 用于扩增C CNB1基因。 3.根据权利要求1所述的结直肠癌相关基因筛查试剂盒， 其中所述引物对分别用于扩 增以下基因： PMEPA1基 因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.1所示的上游引物和SEQ  ID NO.2所示的下 游引物； SULF1基因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.3所示的上游引物和SEQ  ID NO.4所示的下 游引物； MAD2L1基 因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.5所示的上游引物和SEQ  ID NO.6所示的下 游引物； TRIP13基因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.7所示的上游引物和SEQ  ID NO.8所示的下 游引物。 4.根据权利要求1所述的结直肠癌相关基因筛查试剂盒， 其中所述扩增试剂还包括 15mM dATP、 15mM  dCTP、 15mM  dGTP、 15mM  dUTP、 15mM  dTTP， pH为7 ‑9、 浓度为10mM的Tris ‑ HCl+甘油缓冲液， 20mM的MgCl2， 10mM的MnCl2， Taq酶和UNG酶。 5.根据权利要求4所述的结直肠癌相关基因筛查试剂盒， 其中所述的Taq酶为热启动 Taq酶， 所述的UNG酶为尿嘧啶 ‑N‑糖基化酶。 6.根据权利要求1所述的结直肠癌相关基因筛查试剂 盒， 其中还包括对照品和超纯水， 所述对照品包括阴性对照品和阳性对照品。 7.一种使用权利要求1至6任一项所述试剂盒筛查PMEPA1、 SULF1、 MAD2L1、 TRIP13和 CCNB1基因的方法， 是将待测样品与试剂盒内的核酸扩增试剂混合， 放入PCR仪中扩增 后， 拷 贝数变多的样品为阳性结果。 8.根据权利要求7所述的方法， 其中所述扩增的循环体系为85 ‑92℃ 15s， 54‑60℃  60s， 51‑59℃ 60s， 循环45次。 9.根据权利 要求8所述的方法， 其中扩增循环前升温至88℃  30s预变性， 扩增循环结束 后降温至 35℃保温5mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891890 A 2一种结直肠癌相关基因筛查试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及 生物检测技术领域， 特别是涉及一种与人结直肠癌相关基因的筛查试 剂盒。 背景技术 [0002]结直肠癌发展缓慢， 一般会经历息肉、 腺瘤、 肠癌等过程， 从腺瘤发展成为肠癌时 间可长达5 ‑10年。 早期结直肠癌的5年存活率高达90%以上， 而IV期的5年存活率仅为5% ‑7%， 如在结直肠癌发展早期进 行干预， 可显著降低死亡率， 结直肠癌的筛查不 足， 是造成我国结 直肠癌五年 生存期低的主 要原因。 [0003]目前临床应用的影像学、 实验室检查、 肠镜等传统检测方法通常具有敏感性和特 异性低， 或花费高、 有创、 给患者带来不适等缺点。 因此， 临床亟需发展敏感、 特异、 经济、 无 创的方法， 以方便结直肠癌的筛查， 提高疾病诊断效率。 [0004]随着高通量技术的发展， 越来越多的生物标志物被发现， 以进行癌症的诊断和预 测。 研究表明， 应用不同生物标志物对 结直肠癌发生 发展提供了早期诊断和预后方向， 研究 与早期结直肠癌相关的基因标志物， 为实现早期结直肠癌的诊断、 预测受试者发展成为结 直肠癌的风险， 进 而实现早干预早治疗提供了新的手段和方向。 [0005]然而， 癌症的机理相当复杂， 相关基因数量巨大， 不同患者发生变异的基因、 其中 变异的位点及变异形式不同， 仅位点突变就有缺失、 移码、 插入等形式， 一些基因的高表达 或不表达也可能与癌症相关， 因此很难选出有共性的基因， 对全部相关基因进行检测也是 一件几乎不能完成的任务。 因此， 通过有限数目的基因最大程度上判断出基因是否发生变 化尤为重要。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种结直肠癌相关基因筛查试剂盒， 能筛查PMEPA1、 SULF1、 MAD2L1、 TRIP13和C CNB1五个基因的表达情况。 [0007]本发明的另一目的在于提供一种使用结直肠癌筛查试剂盒的方法， 能够通过简单 操作得到特定基因表达量的变化情况， 以此判断筛查结果。 [0008]本发明公开了一种结直肠癌相关基因筛查试剂盒， 包括用于扩增结直肠癌相关基 因的核酸扩增试剂， 其中所述试剂包括SEQ  ID NO.1~10所示5对引物， 用于筛查PMEPA1、 SULF1、 MAD2L1  TRIP13和C CNB1五个基因。 [0009]所述引物对分别用于扩增以下基因： PMEPA1基因的P CR引物对为序列SEQ  ID NO.1所示的上游引物和S EQ ID NO.2所示 的下游引物； S ULF1基因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.3所示的上游引物和SEQ  ID NO.4所 示的下游引物； MAD2L1基因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.5所示的上游引物和SEQ  ID  NO.6所示的下游引物； TRIP13基因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.7所示的上游引物和SEQ   ID NO.8所示的下游引物。 CCNB1基因的PCR引物对为序列SEQ  ID NO.9所示的上游引物和说　明　书 1/7 页 3 CN 114891890 A 3