(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210573995.5 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 中国人民解 放军总医院第一医学中 心 地址 100853 北京市海淀区复兴 路28号 (72)发明人 段智宇　蔡广研　卜茹　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 刘璞 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 25/20(2019.01) G16H 50/30(2018.01) (54)发明名称 一种用于预测IgA肾病肾功能进展的尿液 PCR试剂盒 (57)摘要 本发明涉及检测试剂盒技术领域， 具体涉及 一种用于预测IgA肾病肾功能进展的尿液PCR试 剂盒。 本发明所提供的尿 液PCR试剂盒， 以患者尿 液为样本， 检测尿液中miRNA ‑142‑3p相对表达 量， 作为IgA肾病预测模型中的一个指标， 提高 IgA肾病病情进展和预后的预测准确性。 本发明 提供的尿 液PCR试剂盒解决现在预测模 型中需要 肾穿刺活检术而导致的检测时间较长、 对机体损 伤较大、 适用范围有限、 检测步骤复杂难以推广 等技术难题。 本发明提供的尿液PCR试剂盒可以 用于实现一种无机体创伤、 检测时间短、 适用范 围广、 检测步骤简单的IgA肾病预后评估方法。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图2页 CN 114921541 A 2022.08.19 CN 114921541 A 1.一种用于预测I gA肾病肾功能进展的PCR试剂盒， 其特征在于， 所述PCR试剂盒中含有 扩增miRNA ‑142‑3p的引物序列； 所述引物序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.根据权利要求1所述的PCR试剂盒， 其特征在于， 所述PCR试剂盒用于检测IgA肾病患 者尿液样本中的miRNA ‑142‑3p相对表达量。 3.根据权利要求2所述的PCR试剂盒， 其特征在于， 通过荧光定量PCR检测所述miRNA ‑ 142‑3p相对表达量。 4.根据权利 要求3所述的PCR试剂盒， 其特征在于， 所述PCR试剂盒中还含有管家基因U6 的引物序列， 所述管家基因U6的引物序列如SEQ  ID NO.2所示。 5.根据权利要求4所述的PCR试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中的试剂包括： RNA提取 试剂、 miRNA  cDNA第一链合成试剂、 增强型miRNA荧 光定量检测试剂。 6.根据权利 要求1‑5任一项所述的PCR试剂盒， 其特征在于， 提取IgA肾病患者尿液样本 中尿沉渣的RNA， 并逆转录合成cDNA， 基于SYBR  Green荧光定量PCR获得所述cDNA中miRNA ‑ 142‑3p相对表达量。 7.根据权利要求6所述的PCR试剂盒， 其特征在于， 所述miRNA ‑142‑3p相对表达量临界 值为0.5114。 8.IgA肾病患者尿液中miRNA ‑142‑3p相对表达量在提高IgA肾病病情进展预测模型预 测准确性中的应用。 9.一种新的IgA肾病病情进展的预测模型， 其特征在于， 所述IgA肾病病情进展的预测 模型的检测指标包括患者基线肾小球滤过率、 平均动脉压、 蛋白尿和尿液miRNA ‑142‑3p相 对表达量。 10.权利要求1‑7任一项所述的PCR试剂盒或权利要求9所述的一种新的IgA肾病病情进 展的预测模型在提高IgA肾病终点事 件预测准确性中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921541 A 2一种用于预测IgA肾病肾功能进展的尿液 PCR试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及检测试剂盒技术领域， 具体涉及一种用于预测IgA肾病肾功能进展的 尿液PCR试剂盒。 背景技术 [0002]IgA肾病是世界上最常见的原发性肾小球肾炎之一， 也是导致尿毒症的主要病因 之一。 随着病情进展， IgA肾病患者不仅肾功能逐渐恶化， 还同时会并发高血压、 心血管疾 病、 脑血管疾病以及代谢紊乱等诸多合并症， 使许多IgA肾病患者过早丧失劳动力， 甚至死 亡。 开展IgA肾病的早期无创预后评估， 对改善患者预后、 延缓疾病进 展至尿毒症至关重要。 [0003]目前对于IgA肾病预后评估仍是以传统 肾穿刺活检术后形成的病理分级(牛津分 型)和临床指标结合形成的预测模型。 2019年发表在 JAMAIntern  Med杂志上的研究推出了 最新的IgA肾病病情进展的预测模型 ‑IIgANPT(JAMA  Intern Med.2019； 179( 7):942‑ 952.)， 该模型的预测终点事件定义为患者发生了终末期肾病(肾小球滤过率小于15ml/ min/1.73m2， 进入透析或肾移植)或肾小球滤过率(GFR)较肾穿刺活检时下降了50％。 该公 式分为临床预测模型(仅包含基线肾小球滤过率、 平均动脉压和蛋白尿)、 限制性模 型(在临 床模型的基础上增加了IgA肾病牛津病理分型的MEST分级)和包含或不包含人种的全模型 (在限制性模型基础上进一步增加了年龄、 性别、 人种、 新月体、 体重指数、 肾活检时ACEI/ ARB类药物使用及免疫抑制剂使用)。 其中包含 人种的全模型预测其C统计量(又称一致性统 计量， 为衡量模型区别有或没有发生结果的个体的能力。 本质上， C统计量是评估模型有多 大把握确定它所 预测的患者发生该事 件的能力)为0.82(95％CI  0.81‑0.82)。 [0004]目前该预测模型被国际最权威指 南‑改善全球肾脏病预后组织(KD IGO)所推荐， 用 于IgA肾病患者预后和进展的评估。 此外， IgA肾病肾组织miRNA ‑150‑5p也被报道能预测IgA 肾病病情进展和预后， 但单个指标其预测效力仍无法超过IIgANPT预测模 型， 且同样也来源 于肾组织(Kidney  Int.2021； 9 9(5):1127‑1139.)。 [0005]无论是IIgANPT预测模型中的限制性模型和全模型还是肾组织中miRNA ‑150‑5p的 表达量均需要通过有创的肾穿刺活检术取出肾组织， 经过一系列固定和染色后在光学显微 镜或电子显微镜下观察肾单位变化， 明确 其具体病理分型。 而肾穿刺活检术存在的问题十 分明显， 比如： [0006](1)肾穿刺活检术操作较为复杂， 且取出肾组织后病理切片、 制片和染色等过程对 病理专业要求很高， 专业 性很强。 [0007](2)肾穿刺活检有许多禁忌症。 绝对禁忌症， 如有明显的出血倾向、 无法控制的重 度高血压、 精神病或无法配合者、 孤立肾、 小肾等； 相对禁忌症， 肾脏或泌尿系感染为活动 期 (如活动性肾盂肾炎、 肾结核、 肾脓肿)、 肾肿瘤或肾动脉瘤、 多囊肾、 过度肥胖、 慢性肾功能 衰竭、 重度腹水、 心功能衰竭、 妊娠等。 因此， 不是每个肾脏病患者 都能行肾穿刺活检术得到 及时有效的病情评估。 [0008](3)肾穿刺活检术属于有创性检查， 在肾病早期患者肾功能相对正常， 尿蛋白定量说　明　书 1/9 页 3 CN 114921541 A 3