(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210718527.2 (22)申请日 2022.06.15 (66)本国优先权数据 202110683030.7 2021.0 6.18 CN (71)申请人 舒泰神 （北京） 生物制药股份有限公 司 地址 100176 北京市大兴区经济技 术开发 区经海二路3 6号 申请人 北京三诺佳邑生物技 术有限责任公 司 (72)发明人 孙珍珍　武文君　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测杆状病毒残留DNA的引物、 探 针及方法 (57)摘要 本发明涉及一组检测杆状病毒残留DNA的引 物和探针， 以及通过上述引物和探针检测杆状病 毒残留DNA的方法。 本发明还涉及一种包含上述 引物和探针的试剂盒。 本发明的引物和探针、 检 测方法和试剂盒具有很高的灵敏度和准确性， 能 够快速、 全面地检测和评估重组腺相关病毒 (rAAV)产品中杆状病毒残留DNA。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图1页 CN 115491436 A 2022.12.20 CN 115491436 A 1.一组引物和探针， 其特 征在于， 所述引物和探针的序列包括： 上游引物： 5 ’ ‑CAGCTCCTCTTGAATATGCATCAG ‑3’(SEQ ID NO： 1)； 下游引物： 5 ’ ‑GCCACAACGTTAGAGCCAAGT‑3’(SEQ ID NO： 2)； 探针： 5’ ‑CCTTTGGTGGCAGTGTCTC CCTCTGT‑3’(SEQ ID NO： 3)。 2.根据权利要求1所述的引物和探针， 其特征在于， 所述探针的5 ’端连接有荧光报告基 团， 3’端连接有荧 光淬灭基团。 3.根据权利要求2所述的引物和探针， 其特征在于， 所述荧光报告基团选自FAM、 JOE、 HEX或VIC中的任意 一种， 所述 荧光淬灭基团选自TAMRA、 E clipse或BHQ中的任意 一种。 4.根据权利要求2或3所述的引物和探针， 其特征在于， 所述荧光报告基团为FAM， 所述 荧光淬灭基团为TAMRA。 5.一种检测杆状病毒残留DNA的方法， 其特征在于， 采用权利要求1 ‑4中任一项所述的 引物和探针对待测样品进行检测。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于， 所述方法的步骤 包括： (1)处理待检测样品， 做为模板待用； (2)配制反应体系， 所述反应体系包括： 模板， 上游引物， 下游引物， 探针， 聚合酶等成 分； (3)进行实时荧 光定量PCR反应； (4)结果判定 。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述处理待测样品的步骤包括： 在样品中 按体积比1： 1的比例加 入0.2％的SDS， 95℃孵育30min， 放置于室温后稀释做为扩增 模板使 用。 8.根据权利要求5 ‑7中任一项所述的方法， 其特 征在于， 所述反应 体系为： 9.根据权利要求5 ‑8中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述实时荧光定量PCR的反应 条件为： 第一步： 50℃   2min 第二步： 95℃   10min 第三步： (95℃15s， 6 0℃30s)， 40个 循环 第四步： 37℃2s。 10.根据权利要求5 ‑9任一项所述的方法， 其特征在于， 所述方法中还包括建立标准曲 线的步骤： 取p UC‑gp64重组质粒， 将其以10倍倍比稀释成不同浓度的阳性定量标准品， 以所 述阳性定量标准品做为模板进 行实时荧光定量P CR检测， 从而建立检测杆状病毒残留DNA的权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491436 A 2标准曲线。 11.一种检测杆状病毒残留DNA的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒含有权利要求1 ‑4中 任一项所述的引物和探针。 12.根据权利要求11所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR 扩增试剂、 阳性定量标准品和/或阴性对照。 13.根据权利要求11或12所述的试剂盒， 其特征在于， 所述阳性定量标准品为pUC ‑gp64 重组质粒。 14.权利要求1 ‑4中任一项中所述的引物和探针、 权利要求5 ‑10所述的方法、 权利要求 11‑13所述的试剂盒在检测杆状病毒残留DNA中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491436 A 3